AAT Bioquest  22840  細胞計™凋亡和壞死多重檢測試劑盒 I *三重熒光顏色*

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AAT Bioquest 細胞計凋亡和壞死多重試劑盒-常備現(xiàn)貨

美國 AAT Bioquest Inc.(前身是 ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術。AATBioquest 的產(chǎn)品幫助 quan shi jie 的科學家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。AAT Bioquest 會不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個領域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest  22840  細胞計™凋亡和壞死多重檢測試劑盒 I *三重熒光顏色*  100Tests，產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號：22840

產(chǎn)品名稱：細胞計™凋亡和壞死多重檢測試劑盒 I *三重熒光顏色*

產(chǎn)品規(guī)格：100 Tests

AAT Bioquest 細胞計凋亡和壞死多重試劑盒-常備現(xiàn)貨 

AAT Bioquest  22840  細胞計™凋亡和壞死多重檢測試劑盒 I *三重熒光顏色*  100Tests，產(chǎn)品說明：

我們的細胞計™檢測試劑盒是一套用于監(jiān)測細胞活力的工具?？梢允褂枚喾N參數(shù)。該特定試劑盒旨在監(jiān)測細胞凋亡、壞死和健康細胞。細胞凋亡被描述為一種活躍的、程序化的自主細胞分解過程，可避免引發(fā)炎癥。在細胞凋亡中，磷脂酰絲an酸（PS）轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜的外小葉。作為細胞凋亡初始/中間階段的通用指標，可以在觀察到形態(tài)變化之前檢測到細胞表面磷脂酰絲an酸的外觀。該試劑盒中使用的PS傳感器在與膜PS結合時具有綠色熒光。 壞死已被表征為由環(huán)境擾動引起的被動，意外的細胞死亡，炎癥細胞內(nèi)容物不受控制地釋放。質(zhì)膜完整性的喪失，如膜不可滲透的7-AAD（Ex / Em = 546/647 nm）標記細胞核的能力所證明的那樣，是證明晚期細胞凋亡和壞死的直接方法。此外，該試劑盒還提供用于標記活細胞質(zhì)的活細胞質(zhì)標記染料細胞鈣黃綠素™紫450（Ex / Em = 405 / 450 nm）。該試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可通過流式細胞儀和熒光顯微鏡檢測細胞凋亡（綠色）、壞死（綠色和/或紅色）和健康細胞（藍色）。

組件

組分 A：100X Apopxin™ Green  1 瓶 （200 μL）

組分B：檢測緩沖液               1 瓶 （50 mL）

組件 C：200X 7-AAD            1 瓶 （100 μL）

組分D：細胞鈣黃綠素™紫450          1瓶（凍干粉）

1.    用測試化合物制備細胞（200 μL/樣品）

2.    添加阿普辛™綠色檢測液

3.    在室溫下孵育 30 - 60 分鐘

4.    使用帶發(fā)射濾光片的流式細胞儀分析細胞 530/30 nm（FITC通道 - 用于凋亡細胞），450/40 nm（太平洋藍通道 - 用于健康細胞）和670/14 nm（PE-Cy5通道 - 用于壞死細胞）

重要說明：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

儲備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環(huán)。

1.細胞鈣黃綠素紫450儲備溶液（200X）：

將100μLDMSO加入細胞鈣黃綠素紫450（組分D）的小瓶中，制成200X細胞鈣黃綠素紫450儲備™溶液。™™避光。】

實驗方案樣本

用Apopxin™Green制備并孵育細胞：

1.    用測試化合物處理細胞一段時間（用星形孢菌素處理的Jurkat細胞為4-6小時）以誘導細胞凋亡。

2.    離心細胞得到1-5×10⁵細胞/管。

3.    將細胞重懸于 200 μL 檢測緩沖液（組分 B）中。

4.    向細胞中加入 2 μL 100X Apopxin ™綠（組分 A）。

5.    可選 1：向壞死細胞中加入 1 μL 200X 7-AAD（組分 C）。

6.    可選 2：然后將 1 μL 200X 細胞鈣黃綠素™紫 450 儲備溶液加入細胞中，用于健康細胞染色。

7.    在室溫下孵育 30 至 60 分鐘，避光。

8.    在用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞之前，加入 300 μL 測定緩沖液（組分 B）以增加體積。

9.    使用帶有發(fā)射濾光片的流式細胞儀監(jiān)測熒光強度 530/30 nm（FITC通道 - 用于凋亡細胞），450/40 nm（太平洋藍通道 - 用于健康細胞）和670/14 nm（PE-Cy5通道 - 用于壞死細胞）。

使用流式細胞儀分析細胞：

1.    使用帶有發(fā)射濾光片的流式細胞儀定量Apopxin™ Green結合530 / 30 nm（FITC通道 - 用于凋亡細胞），450 / 40 nm（Pacific Blue 通道 - 用于健康細胞）和670 / 14 nm（PE-Cy5通道 - 用于壞死細胞）。注意：Apopxin™與貼壁細胞結合的流式細胞術分析未經(jīng)常規(guī)測試，因為在細胞分離或收獲過程中可能發(fā)生特定的膜損傷。然而，利用膜聯(lián)蛋白V對貼壁細胞類型進行流式細胞術的方法先前已由Casiola-Rosen等人和van Engelend等人報道。

使用熒光顯微鏡分析細胞：

1.    孵育后移液細胞懸液，用檢測緩沖液沖洗1-2次，然后用檢測緩沖液重懸細胞。

2.    將細胞添加到覆蓋有玻璃蓋玻片或黑色壁/透明底部96孔微孔板的載玻片上。注意：對于貼壁細胞，建議直接在蓋玻片（或黑壁/透明底部96孔微孔板）上培養(yǎng)細胞。用Apopxin™ Green孵育后，用檢測緩沖液沖洗1-2次，然后將檢測緩沖液加回蓋玻片（或黑色壁/透明底部96孔微孔板）。在載玻片上倒置蓋玻片并可視化細胞。細胞也可以在與Apopxin™ Green孵育后固定在2%甲醛中，并在顯微鏡下觀察。

3.    使用FITC濾光片在熒光顯微鏡下用Apopxin™ Green分析凋亡細胞。當添加7-AAD時，使用德克薩斯紅過濾器測量細胞活力，當將細胞鈣黃綠素™紫450添加到細胞中時，使用DAPI或紫色過濾器測量細胞活力。質(zhì)膜上的綠色染色表明Apopxin™ Green與細胞表面的PS結合。

產(chǎn)品訂購信息：

22840  細胞計™凋亡和壞死多重檢測試劑盒 I *三重熒光顏色*  100Tests