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用水浴鍋?zhàn)鲑|(zhì)粒DNA提取的實(shí)驗(yàn)方法
實(shí)驗(yàn)方法原理：
質(zhì)粒多為一些雙鏈、環(huán)狀的DNA分子，是獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外進(jìn)行復(fù)制和遺傳的輔助性遺傳單位。質(zhì)粒是進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作，進(jìn)行遺傳工程改良物種等工作時(shí)zui主要的DNA載體。
提取質(zhì)粒的基本步驟分為三步：
①細(xì)菌的培養(yǎng)和質(zhì)粒的擴(kuò)增
②細(xì)菌菌體的裂解
③質(zhì)粒DNA的純化
實(shí)驗(yàn)材料：
大腸桿菌
試劑、試劑盒：ris-Hcl EDTA葡萄糖 NaOHKAacNaAc異丙醇溶菌酶酚LB培養(yǎng)基
儀器、耗材：超凈工作臺(tái)、 培養(yǎng)箱、 搖床、 恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、取液器、低溫冰箱、冷凍真空干燥機(jī)、電泳儀、水平電泳槽、紫外觀測(cè)儀
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、材料與試劑準(zhǔn)備
1. 材料：大腸桿菌。
2. 儀器：超凈工作臺(tái)，培養(yǎng)箱，搖床，恒溫水浴鍋，臺(tái)式離心機(jī)，取液器一套，低溫冰箱，冷凍真空干燥機(jī)，電泳儀，水平電泳槽，紫外觀測(cè)儀。
3. 試劑：
（1）Solution I ：25 mM Tris-Hcl(pH7.4)，10 mM EDTA(pH8.0)，50 mM葡萄糖，高壓滅菌，4℃保存。
（2）Solution II ：0.2 M NaOH， 1%SDS 現(xiàn)配現(xiàn)用。
（3）Solution III ：5 N KAc pH4.8，高壓滅菌，4℃保存。
（4）3 M NaAc pH5.2，高壓滅菌，4℃保存。
（5）異丙醇，溶菌酶（8 mg/ml），無水乙醇，70%乙醇，LB培養(yǎng)基，電泳試劑。