Rosetta 2(DE3)感受態(tài)
Rosetta 系列菌株來(lái)源于 BL21 系列宿主菌,該系列菌株含有原本在大腸桿菌中稀少的真核細(xì)胞密碼
子,增加了真核細(xì)胞的蛋白表達(dá)水平。Rosetta 2(DE3)來(lái)源于 Rosetta(DE3),本菌株含有 pRARE2 質(zhì)
粒,除了能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個(gè)稀有密
碼子的 tRNA 外,還提供了第七個(gè)稀有密碼子 CGG 的 tRNA,這使得該宿主菌相對(duì)于其他大腸桿
菌,能夠提供更加“通用"的蛋白質(zhì)表達(dá),從而提升目的蛋白表達(dá)水平。DE3 是溶源性的 λDE3 序列,
可表達(dá)T7 RNA聚合酶,因而適用于pET系列載體,及其他T7啟動(dòng)子系列的載體。值得注意的是,
pRARE2 質(zhì)粒具有氯霉素抗性。Rosetta 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC18 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化
效率達(dá) 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
Rosetta 2(DE3)
感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型:F- ompT hsdSB (rB– mB–) dcm gal (DE3) pRARE2 (argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL, argX)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存;請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除 pRARE2 外,無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留;
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動(dòng),熱激 90s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min;
4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基(室溫或 37 ℃預(yù)熱),然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min;
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10;
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞,僅用手指輕彈即可;
4. 為確保高轉(zhuǎn)化效率,整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。
Rosetta 2(DE3)感受態(tài)
