脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

FAS 是脂肪酸合成關(guān)鍵酶，催化乙酰fu酶A 和丙二酰fu酶A 而生成長(zhǎng)鏈脂肪酸。FAS 普遍表達(dá)于各種組織細(xì)胞中，在哺乳動(dòng)物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達(dá)豐富。

測(cè)定原理：

FAS 催化乙酰CoA、丙二酰 CoA 和NADPH 生成長(zhǎng)鏈脂肪酸和NADP⁺；NADPH 在 340nm 有吸收峰，而NADP⁺沒(méi)有；通過(guò)測(cè)定 340nm 光吸收下降速率，計(jì)算 FAS 活性。

脂肪酸合成酶活性試劑盒-常備現(xiàn)貨

組成：

BR6009-10T/9S:

試劑一：液體 10ml×1 瓶，－20℃保存。用前取出置于 4℃充分解凍后混勻。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 275 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 275 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 525 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

BR6009-25T/24S:

試劑一：液體 25ml×1 瓶，－20℃保存。用前 1 d 取出置于 4℃充分解凍后混勻。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 550 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 550 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 1050 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

BR6009-50T/48S:

試劑一：液體 50ml×1 瓶，－20℃保存。用前 1 d 取出置于 4℃充分解凍后混勻。

試劑二：粉劑×1 瓶。臨用前加入 1100 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 1100 μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 2100μl 試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1ml 石英比色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心 40min，取上清置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 12000g， 4℃，離心 40min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 血清等液體：直接測(cè)定。

FAS 測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 340 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑四置于 40℃水浴中預(yù)熱 30 min。

3. 測(cè)定管：在 1ml 石英比色皿中依次加入 100μl 上清液、20μl 試劑二、20μl 試劑三、820μl 試劑四和 40μl試劑五，迅速混勻后于 340nm 處測(cè)定吸光值，記錄第 30s 和 90s 時(shí)吸光值，分別記錄為 A1 和A2?！?/span>A 測(cè)=A1-A2。

FAS 活性計(jì)算公式：

（1） 按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個(gè)酶活單位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反總×10⁹) ÷(Cpr×V 樣)÷T

=1608×△A÷Cpr

（2） 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個(gè)酶活單位。

FAS(nmol/min/g 鮮重) = (△A÷ε÷d×V 反總×10⁹) ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=1608×△A ÷W

（3） 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義：37℃中每 10⁴ 個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個(gè)酶活單位。

FAS(nmol /min/10⁴cell) = (△A÷ε÷d×V 反總×10⁹) ÷(細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T

=1608×△A ÷細(xì)胞數(shù)量

（4） 按液體體積計(jì)算

活性單位定義：37℃中每毫升樣本每分鐘氧化 1nmol NADPH 為 1 個(gè)酶活單位。

FAS(nmol /min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反總×10⁹) ÷V 樣÷T

=1608×△A

ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積，1000μl=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μl=0.1 ml； T：反應(yīng)時(shí)間，1min。

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