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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

人類(lèi) HER-2 基因（Human HER-2 Gene）是迄今為止被研究的比較透徹的乳腺癌基因之一。該基因是臨床治療監(jiān)測(cè)的預(yù)后指標(biāo)，也是腫瘤靶向治療藥物選擇的一個(gè)重要靶點(diǎn)。HER-2 癌基因的致瘤機(jī)制是抑制凋亡，促進(jìn)增殖；增加腫瘤細(xì)胞的侵襲力；促進(jìn)腫瘤血管新生和淋巴管新生。血清 HER-2 與乳腺癌患者的腫瘤負(fù)荷、組織學(xué) HER-2、淋巴結(jié)狀況均有一定關(guān)聯(lián)，并可能是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素，可能對(duì)化-療或內(nèi)分泌治療療效產(chǎn)生一定影響，因此快速檢測(cè)人類(lèi)HER-2 基因具有重要的意義。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供樣品 DNA 模板。

2.引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到 100 拷貝/μL。。

3.引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專(zhuān)一性強(qiáng)，只擴(kuò)增人類(lèi) HER-2 基因。

4.提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

5.既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線(xiàn)性范圍至少為   5 個(gè)數(shù)量級(jí)。

6.本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?PCR 反應(yīng)。。

7.人類(lèi)HER-2基因探針?lè)晒舛縋CR試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿(mǎn)足一定規(guī)模的檢測(cè)需求。

檢測(cè)方法

實(shí)時(shí)熒光PCR，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn)。

試劑盒成分

2×Probe qPCR MasterMix、熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液、超純水、人類(lèi)HER-2基因 qPCR 引物-探針干粉、人類(lèi)HER-2基因 陽(yáng)性對(duì)照(1E7 拷貝/μL)、使用手冊(cè)。

自備試劑

超純水，樣品 DNA。

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。 

使用方法：

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能

污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，  本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2，1。

2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。

3.在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

4.換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

5.換槍頭，在 4 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7.如果有 N 個(gè)樣品，最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?10μL 上步所得 4 號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始樣本體積一樣，以此作為 PC。另外用水作為 NC。

8.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)樣品 DNA-提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的核酸-提取試劑。

三、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9.如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（直接用第 6 步第 4 號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加）：

成分樣品管

N+2 個(gè)PCR

陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品管

（1-6 管）

2×Probe qPCR MasterMix各 10 μL10 μL各 10 μL

人類(lèi) HER-2 基因 qPCR

引物-探針混合液各 3 μL3 μL各 3 μL

N+2 個(gè)待測(cè) DNA 樣本各 7 μL不加不加

超純水不加7 μL不加

第 6 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

樣品稀釋液（1-6 號(hào)）不加不加各 7μL（2 號(hào)樣到 2 號(hào)

管，3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…）

11.蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR：

過(guò)程溫度時(shí)間

預(yù)變性95℃2 min

PCR 反應(yīng)

（45 個(gè)循環(huán)）95℃15 sec

58℃30 se（c 采集 FAM 通道的熒光信

號(hào)，設(shè)置 BHQ-1 為淬滅基團(tuán)）

四、數(shù)據(jù)處理

12.如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上推算出樣品DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。

13.如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照必須無(wú) Ct 或 Ct 大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線(xiàn)， Ct 值應(yīng)該小于 40，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析待測(cè)樣品，如果無(wú) Ct 或 Ct 大于或等于 40，則為陰性。如果 Ct 小于 40 則為陽(yáng)性。

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