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產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品是用于一管式雙鏈 cDNA 合成的試劑盒。cDNA 第一鏈合成的原理是以 Oligo dT 為通用引物的、MMLV 催化的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，含有合成兩條 cDNA 鏈的所有試劑，用戶只需要提供mRNA。

2.一管式進(jìn)行，第一鏈 cDNA 合成后直接進(jìn)入第二鏈的合成。

3.所得雙鏈 cDNA 可以直接用于后續(xù)的常規(guī) PCR、real-time PCR、 cDNA 文庫構(gòu)建、抑制性差減雜交等。

4.本試劑盒足夠 10 次 80 uL 體系的雙鏈 cDNA 合成反應(yīng)。

5.一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝材料

cDNA 第一鏈合成反應(yīng)液

（含 Oligo-dT 和 dNTP）50 uL0.5 mL 綠蓋管

MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶10 uL0.5 mL 紅蓋管

5×cDNA 第二鏈合成反應(yīng)液160 uL0.5 mL 白蓋管

20×cDNA 第二鏈

合成酶混合液40 uL0.5 mL 黃蓋管

超純水1 mL1.5 mL 藍(lán)蓋管

使用手冊1 份無

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

mRNA 提取試劑盒

使用方法：

一：mRNA 的制備

本試劑盒不提供mRNA 提取試劑，用戶需自備相關(guān)試劑。二：雙鏈 cDNA 的合成

1.在一個干凈的塑料離心管中，按下表設(shè)置 cDNA 合成反應(yīng)：

成分用量

自備樣品mRNA4 uL（0.5-2ug）

cDNA 第一鏈合成緩沖液

（含 Oligo dT 引物和 dNTP）5 uL

70℃ 2 分鐘后室溫放置 2 分鐘，短暫離心

加入 MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶1 uL

輕柔吹打混勻后 42℃保溫 90 分鐘合成第一鏈 cDNA

超純水48 uL

5×cDNA 第二鏈合成緩沖液16 uL

20×cDNA 第二鏈合成酶混合液4 uL

共 80uL。吹打混勻后，短暫離心，16℃保溫 2 小時

2.如果需要將雙鏈 cDNA 平末端化，則需加自備 T4 DNA 聚合酶 2 uL，輕柔吹打混勻后，16℃繼續(xù)保溫 30 分鐘。然后進(jìn)入下一步。如果不需要將 cDNA 平末端化，則直接進(jìn)入下一步。

3.終止反應(yīng)：如果后續(xù)實(shí)驗(yàn)(如電泳)不擔(dān)心 EDTA 的影響，可以直接加入 4 uL 0.2M EDTA 溶液終止反應(yīng)，然后將樣品放-20℃長期保存。如果后續(xù)實(shí)驗(yàn)

（如PCR 擴(kuò)增）不擔(dān)心cDNA 的單雙鏈狀態(tài)，可以 95℃保溫 10 分鐘終止反應(yīng)。如果后續(xù)實(shí)驗(yàn)既受EDTA 影響，又不能是單鏈DNA，則可以用 PCR過柱純化法純化。

4.電泳 5uL 檢測 cDNA 質(zhì)量。如果 cDNA 在 0.5-10Kb 的范圍內(nèi)呈模糊一片，則 cDNA 合格。如果沒看見 cDNA 或有其他異常，需查找原因后再繼續(xù)。

5.所得 cDNA 可以直接用于后續(xù)的常規(guī) PCR、real-time PCR、cDNA 文庫構(gòu)

建、抑制性差減雜交等實(shí)驗(yàn)。

選擇我們的一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！