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豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：12個月

產(chǎn)品組成

組分含量含量含量

(1)抗原包被板1板2板5板

(2)陽性對照1ml*1（藍蓋）1.5ml*12ml*1

(3)陰性對照1ml*1（紅蓋）1.5ml*12ml*1

(4)酶標記物11ml*1（綠蓋）25ml*160ml*1

(5)樣品稀釋液25ml*1（藍蓋）50ml*1150ml*1

(6)20倍濃縮洗滌液25ml*1 (黃蓋)50ml*1150ml*1

(7)底物顯色液11ml*1（棕蓋）20ml*150ml*1

(8)終止液6ml*1 (紅蓋)11ml*126ml*1

(9)血清稀釋板1板2板5板

(10)說明書1份1份1份

注意事項

（1）實驗前，將試劑盒取出置25℃±3回溫，至少30分鐘，實驗完成后置2～8℃保存。

（2）若試劑盒陰陽性對照、酶標記物出現(xiàn)少量懸浮物，屬正?，F(xiàn)象。

（3）請在豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒規(guī)定的有效期內(nèi)使用；禁止非同批試劑盒混用。

（4）沒有用完的抗原包被板應貯存在密封塑料袋內(nèi)，置2～8℃存放。

（5）避免底物液暴露于強光，避免接觸氧化劑。

（6）濃縮洗滌液用蒸餾水或純水稀釋，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。

（7）嚴格按照操作程序，仔細的吸液、計時，充分洗滌，對于獲得精確的結(jié)果是非常必要的。

（8）使用樣品稀釋板將所有待檢血清稀釋好，再進行檢測。

操作步驟

1  用法

1.1  樣品準備  取動物全血，4000r/min離心10分鐘，收集上清?；虿杉?，待凝固后自然析出血清。血清清亮，無溶血。

1.2  樣品稀釋  將待檢血清樣品在樣品稀釋板中按1:40的比例稀釋（例如：在樣品稀釋板中先加入195μl樣品稀釋液，加5μl待檢血清。不同的樣品要注意換吸頭。樣品在稀釋過程中要充分混勻。陰性、陽性對照不稀釋，直接使用。

1.3  洗滌液配制 20倍濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫（20~25℃），然后用蒸餾水或純水作10倍稀釋，混勻（例如：10ml的濃縮洗滌液加上90ml純水）。

1.4  操作步驟

1.4.1  取抗原包被板（根據(jù)樣本多少，可拆開分次使用），每孔加入稀釋好的樣本100μl；另外設(shè)陽性對照、陰性對照各2孔，100μl/孔。置37℃孵育30分鐘。

1.4.2  棄去板中液體，每孔加入稀釋好的洗滌液300µl，棄掉孔中洗滌液，重復洗滌5次，拍干。

1.4.3  每孔加入100μl酶結(jié)合物，輕微振蕩混勻。置37℃孵育30分鐘。

1.4.4  棄去板中液體，洗滌5次，方法同1.4.2。

1.4.5  每孔加底物顯色液100µl，室溫（20~25℃）避光顯色10分鐘。

1.4.6  每孔加終止液50µl。10分鐘內(nèi)用酶標儀測定并記錄各孔在450nm波長處的吸光度（OD）值（測定前輕輕振勻，勿溢出）。

2  判定

2.1  成立條件  在酶標儀上測各孔的OD450nm值。試驗成立的條件是：陰性對照孔平均OD450nm值應＜0.5，陽性對照孔平均OD450nm值應＞0.5。

2.2  判定標準  

    S為樣品孔OD450nm值，P為陽性對照孔平均OD450nm值，計算樣品S/P值。

若S/P值≥0.2時判為陽性；若S/P值＜0.2時判為陰性。