替加環(huán)素(Tigecycline)結(jié)構(gòu)與四環(huán)素類藥物相似,是一種新型廣譜抗菌素,是首個(gè)被批準(zhǔn)用于臨床的靜脈內(nèi)給藥的甘氨酰環(huán)素類抗生素。對(duì)有抗藥性的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌有活性,F(xiàn)DA于2005年6月批準(zhǔn)上市。叔丁胺(SDA)鹽酸鹽是替加環(huán)素的一種原料,本身具有較高的毒性,需要開(kāi)發(fā)測(cè)定有關(guān)物質(zhì)的方法;而N-叔丁基甘氨酸鹽則是替加環(huán)素的重要中間體,也需要測(cè)定N-叔丁基甘氨酸在替加環(huán)素中的殘留情況。
N-叔丁基甘氨酸同時(shí)有氨基和羧酸基團(tuán),是兩性化合物;而叔丁胺的極性較大,這兩種化合物在常規(guī)C18柱上均無(wú)法保留。淋洗液中加入離子對(duì)試劑可延長(zhǎng)叔丁胺保留時(shí)間,但其本身無(wú)特征紫外吸收波長(zhǎng),采用末端吸收干擾較大,無(wú)法滿足有關(guān)物質(zhì)分析的要求。在酸性條件下,叔丁胺與酸成鹽后帶正電荷,可以采用陽(yáng)離子分析柱分離后通過(guò)電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)。分析N-叔丁基甘氨酸可采用柱前衍生法使其在色譜柱上有保留,在紫外檢測(cè)器中有響應(yīng),但操作繁瑣,且可能受替加環(huán)素基體影響較大。采用陰離子交換安培檢測(cè)方法測(cè)定N-叔丁基甘氨酸不需要衍生,且安培檢測(cè)的靈敏度高,滿足低含量有關(guān)物質(zhì)分析的要求
(1)叔丁胺測(cè)定條件:儀器:離子色譜儀帶電導(dǎo)檢測(cè)器;色譜柱:IonPac CS17分析柱,7 µm,250×4 mm, P/N:060557; IonPac CG17保護(hù)柱,7 µm,50×4 mm, P/N:060560;柱溫:30℃;流動(dòng)相:梯度淋洗見(jiàn)表1-14;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣體積:25 µL;檢測(cè)器:電導(dǎo)(電導(dǎo)池溫度35℃),陽(yáng)離子電解再生抑制器,自循環(huán)模式;譜圖見(jiàn)1-25
(2)N-叔丁基甘氨酸測(cè)定條件:儀器:離子色譜儀帶安培檢測(cè)器色譜柱:AminoPac PA10分析柱,8.5 µm,250×2 mm,P/N:055406; AminoPac PA10保護(hù)柱,8.5 µm,50×2 mm,P/N:055407;柱溫:30℃;流動(dòng)相:梯度淋洗;條件參見(jiàn)表1-15,A:DI water;B:250 mmol/L NaOH;C:1000 mmol/L NaOAc;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣體積:25 µL;檢測(cè)方式:脈沖安培檢測(cè)(PAD),AAA Au電極,pH參比模式,氨基酸六電位波形;譜圖見(jiàn)1-26
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