?色譜柱活化方法的核心步驟是根據(jù)色譜柱類型選擇合適的沖洗流程，旨在替換保存液、去除雜質(zhì)并平衡固定相。?不同色譜柱的活化方法差異顯著，需遵循以下分類操作：

一、常見色譜柱活化方法分類說明

1. ?反相色譜柱（如C18柱）?：

• ?第一步?

  ：用純有機溶劑（甲醇或乙腈）沖洗20-30個柱體積?

• ?第二步?

  ：混合過渡流動相（甲醇/乙腈與水比例50:50）沖洗10個柱體積?

• ?第三步?

  ：用實際分析流動相平衡10-30個柱體積直至壓力穩(wěn)定?

• ?注意事項?

  ：活化過程不宜接入檢測器，避免污染?

2. ?正相色譜柱?：

• ?直接使用流動相平衡20-30個柱體積?

  ，無需過渡沖洗?

• ?特殊保存狀態(tài)?

  ：部分正相柱保存于正己烷或異丙醇，活化時需按出廠說明調(diào)整?

3. ?離子交換色譜柱（如SAX、SCX）?：

• ?第一步?

  ：用100%甲醇或乙腈沖洗20個柱體積?

• ?第二步?

  ：轉(zhuǎn)換為適合離子強度和pH值的流動相平衡?

4. ?特殊功能柱（如氨基柱、氰基柱轉(zhuǎn)為反相使用）?：

• ?預(yù)處理?

  ：需用異丙醇或乙醇沖洗50-100個柱體積轉(zhuǎn)換相態(tài)

5. ?HILIC模式色譜柱?：

• ?活化流程?

  ：先用50倍柱體積的50%乙腈/水混合液平衡，再用流動相沖洗20柱體積

二、通用活化原則

• ?流速控制?

  ：初始沖洗采用低流速（如0.5-1mL/min），逐步提升至工作流速?

• ?溶劑純度?

  ：必須使用HPLC級溶劑并提前過濾?

• ?柱體積計算?

  ：標(biāo)準(zhǔn)柱體積約為柱長（cm）× 內(nèi)徑半徑2（cm2）× π，可根據(jù)具體尺寸換算

三、操作建議

• ?新柱活化前?

  ：建議建立色譜柱性能測試臺賬，追蹤柱壓和峰型變化

• ?長期保存后?

  ：需重新活化，避免使用緩沖鹽保存

• ?維護(hù)擴展?

  ：日常使用可搭配預(yù)柱保護(hù)延長分析柱壽命

?關(guān)鍵提示?：活化方法需嚴(yán)格參照色譜柱說明書，廠商建議的柱保存液和pH適用范圍是操作基準(zhǔn)。?