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蛋白純化磁珠/試劑盒——高效捕獲目標分子

來源:愛必信(上海)生物科技有限公司   2025年06月04日 10:58  

實驗原理

蛋白純化磁珠/試劑盒基于特異性生物分子相互作用實現(xiàn)目標分子的精準捕獲與純化。磁珠表面修飾有高親和力的配體(如抗體、鏈霉親和素、His標簽結合基團等),可與目標蛋白特異性結合。例如,抗體偶聯(lián)磁珠通過抗原-抗體結合原理選擇性吸附目標蛋白,而鏈霉親和素磁珠則利用生物素-親和素的高親和力捕獲生物素化分子。

結合后,通過磁力分離技術快速將磁珠-目標分子復合物與雜質分離,再經洗滌去除非特異性吸附,最終通過改變緩沖液條件(如pH調整、競爭性洗脫)釋放高純度目標產物。該技術兼具高效、溫和、可自動化等優(yōu)勢,適用于復雜樣本(如血清、細胞裂解液)中微量目標的純化。

實驗步驟(以抗體偶聯(lián)磁珠為例)


蛋白純化磁珠/試劑盒——高效捕獲目標分子


1、樣本預處理

離心去雜:將樣本(如血清)以3000g離心10分鐘,去除細胞碎片或顆粒物。

裂解(可選) :若目標為細胞內成分,使用裂解緩沖液(含蛋白酶抑制劑)處理樣本,超聲破碎后離心取上清。

2、磁珠孵育

磁珠活化:渦旋混勻磁珠懸液,取適量磁珠置于離心管中,用預冷PBS洗滌2次以去除儲存液。

結合目標分子:將預處理樣本與磁珠混合,室溫旋轉孵育30分鐘,確保充分接觸。


3、磁分離與洗滌

磁吸去上清:將離心管置于磁力架上靜置2-3分鐘,待溶液澄清后吸棄上清。

洗滌雜質:加入洗滌緩沖液(如含0.1% Tween-20的PBS),輕柔重懸磁珠,重復磁吸步驟2-3次以去除非特異性結合。


4、目標分子洗脫

競爭性或條件洗脫:

酸性洗脫:加入低pH緩沖液(如pH 2.8甘氨酸-HCl),孵育5分鐘,中和后立即轉移上清以保護目標活性。

生物素競爭:對于鏈霉親和素磁珠,加入過量游離生物素競爭性解離目標分子。

磁珠再生(可選) :部分試劑盒支持磁珠再生,通過去離子水、再生緩沖液處理后可重復使用。

總耗時:約60分鐘,批間差異<5%,回收率可達90%以上。

產品優(yōu)勢

  • 釋放微球,擺脫樣品體積、試劑流速、層析柱壓力和洗脫體積的限制。

  • 同時實現(xiàn)固液和液液分離,簡化步驟,減少損耗,節(jié)省時間。

  • 突破分泌蛋白和包涵體蛋白純化的技術瓶頸。

  • 減少對儀器設備的依賴,降低維護和保養(yǎng)成本。

  • 操作穩(wěn)定,便于高通量和大規(guī)模蛋白純化。

  • 產品性能穩(wěn)定,批次間差異小。

  • 實現(xiàn)高產率、高純度的目標蛋白。


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蛋白純化磁珠/試劑盒——高效捕獲目標分子


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