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凝膠色譜是一種基于分子尺寸差異進(jìn)行分離分析的技術(shù)
凝膠色譜是一種基于分子尺寸差異進(jìn)行分離分析的技術(shù)，在生物化學(xué)、高分子科學(xué)等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，利用凝膠基質(zhì)的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)作為分子篩，通過(guò)分子大小差異實(shí)現(xiàn)分離。當(dāng)樣品流經(jīng)凝膠柱時(shí)，較小分子可進(jìn)入凝膠孔隙，路徑延長(zhǎng)導(dǎo)致滯留時(shí)間增加；較大分子因無(wú)法進(jìn)入孔隙，沿凝膠顆粒間隙快速流出。這種基于流體力學(xué)體積(Hydrodynamic Volume)的差異，使得分子按尺寸由大到小依次被洗脫。
凝膠色譜的技術(shù)分類：
1.凝膠過(guò)濾色譜(GFC)：以水溶液為流動(dòng)相，適用于蛋白質(zhì)、多肽、核酸等生物大分子的分離純化。例如，用Sephadex G-25凝膠可有效分離胰島素(分子量5800 Da)與單體氨基酸。
2.凝膠滲透色譜(GPC)：采用有機(jī)溶劑體系，專用于高聚物(如聚乙烯、聚苯乙烯)的分子量測(cè)定。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線法可計(jì)算聚合物的重均分子量(Mw)和分子量分布指數(shù)(PDI)。
凝膠色譜儀的使用注意事項(xiàng)：
1.色譜柱保護(hù)：避免使用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或有機(jī)溶劑清洗色譜柱，以免損壞凝膠填料。定期清洗色譜柱，防止樣品殘留和雜質(zhì)污染。
2.流動(dòng)相控制：確保流動(dòng)相的流速穩(wěn)定，避免過(guò)快或過(guò)慢影響分離效果。同時(shí)，要注意流動(dòng)相的溫度控制，以保持實(shí)驗(yàn)條件的穩(wěn)定性。
3.樣品處理：樣品應(yīng)盡可能純凈，無(wú)雜質(zhì)和顆粒物。對(duì)于復(fù)雜樣品，可能需要進(jìn)行預(yù)處理以提高分離效果。
4.儀器維護(hù)：定期檢查和維護(hù)，包括更換老化的部件、清洗檢測(cè)器等，以確保儀器的正常運(yùn)行和準(zhǔn)確性。
5.安全操作：在使用有機(jī)溶劑時(shí)，要注意防火、防爆和通風(fēng)換氣。同時(shí)，要遵循實(shí)驗(yàn)室的安全操作規(guī)程，確保人員安全。
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