豬高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-4707 豬高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒

　　以下是豬高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合整理：

　　一、實驗原理

　　采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。預先包被HDL捕獲抗體的微孔板中依次加入標本、標準品和HRP標記檢測抗體，經(jīng)溫育洗滌后，通過TMB顯色反應(藍色→黃色)測定450nm吸光度，顏色深淺與HDL濃度呈正相關(guān)。

　　二、樣本處理要求

　　血清?：采集后1000×g離心10分鐘分離，避免溶血或脂血;

　　血漿?：EDTA/肝素抗凝，1000×g離心30分鐘去除顆粒;

　　組織勻漿?：需充分勻漿后離心取上清;

　　保存?：2-8℃可存7天，長期需分裝于-20℃以下，避免反復凍融。

　　三、試劑盒組成

　　預包被微孔板

　　HDL標準品(不同濃度)

　　HRP標記檢測抗體

　　TMB顯色底物、終止液

　　洗滌緩沖液(20×濃縮需稀釋)

　　四、操作步驟

　　加樣?：

　　標準品孔：梯度濃度各50μL;

　　樣本孔：樣本40μL+稀釋液10μL(5倍稀釋);

　　孵育?：37℃避光溫育60分鐘，封板膜密封;

　　洗滌?：棄液后加洗滌液靜置30秒，重復5次，拍干;

　　顯色?：每孔加TMB底物50μL，37℃避光顯色15分鐘;

　　終止?：加終止液50μL，15分鐘內(nèi)測定450nm OD值。

　　五、注意事項

　　試劑保存?：未使用板條需密封防潮，2-8℃保存;

　　操作規(guī)范?：

　　不同批號試劑勿混用;

　　移液誤差需<2%，避免產(chǎn)生氣泡;

　　顯色后顏色異常(如深藍色)需棄用;

　　質(zhì)量控制?：

　　批內(nèi)CV<10%，批間CV<12%;

　　每批次實驗需同步標準曲線。

　　六、結(jié)果計算

　　以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制曲線，通過樣本OD值計算濃度。

　　注：本試劑盒僅限科研使用，不可用于臨床診斷，以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師。

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