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一、技術(shù)簡介
IP(免疫沉淀,Immunoprecipitation)和Co-IP(免疫共沉淀,Co-Immunoprecipitation)是研究蛋白質(zhì)功能及相互作用的核心技術(shù),廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。
二、技術(shù)原理
IP通過特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合,利用抗體將靶標(biāo)蛋白(即抗原)分離出來,從而檢測某一種蛋白的表達(dá)情況;而CO-IP是在IP基礎(chǔ)上,驗(yàn)證蛋白質(zhì)間的相互作用。通過捕獲一個(gè)蛋白(誘餌蛋白),檢測與其結(jié)合的互作蛋白(靶蛋白),從而特異性富集所研究的目的蛋白,進(jìn)而研究復(fù)合物中與已知蛋白存在相互作用的蛋白。
三、應(yīng)用場景
IP:富集低豐度蛋白用于質(zhì)譜鑒定(IP-MS)、驗(yàn)證抗體特異性。
Co-IP:研究轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物、激酶-底物相互作用及驗(yàn)證已知互作或發(fā)現(xiàn)新互作伙伴(如信號(hào)通路復(fù)合物)。
四、技術(shù)優(yōu)勢
IP:具有高特異性,依賴抗體-抗原的專一性結(jié)合。
靈活性:支持物可選磁珠(操作簡便、自動(dòng)化兼容)或瓊脂糖(高結(jié)合容量)。
Co-IP:體內(nèi)真實(shí)性:研究的是體內(nèi)自然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)互作,可反應(yīng)比較真實(shí)的蛋白互作。
五、樣本類型
新鮮細(xì)胞(貼壁細(xì)胞/懸浮細(xì)胞)、凍存細(xì)胞、凍存組織、裂解液樣本。
六、樣本需求
細(xì)胞樣本:約5×10^6個(gè)(可以是2個(gè)6cm皿,或以懸浮細(xì)胞形式存儲(chǔ)于離心管中,或2個(gè)T25瓶);
凍存組織:約40mg;裂解液樣本:蛋白濃度不低于2mg/mg,蛋白總量不低于3mg。
七、樣本準(zhǔn)備&運(yùn)輸
活細(xì)胞樣本:距離較近的可提供新鮮樣本,將培養(yǎng)在皿/T25瓶/離心管內(nèi)的新鮮細(xì)胞樣本常溫快遞(最遲次日達(dá))運(yùn)輸,本市內(nèi)可閃送或親自遞送,距離較遠(yuǎn)的,可-80℃凍存細(xì)胞干冰運(yùn)輸;
組織樣本&裂解液樣本:-80℃凍存干冰運(yùn)輸。
八、需提供的試劑
檢測用IB抗體和IP抗體
九、實(shí)驗(yàn)周期
1-2周(不包含質(zhì)譜)
十、其他
后續(xù)檢測Western blot/蛋白質(zhì)譜