成都邁?？缮镉拈T螺桿菌科研用脲酶檢測技術(shù)服務(wù)

高靈敏度、多方法聯(lián)用的脲酶活性定量分析方案

1. 產(chǎn)品概述

幽門螺桿菌（H. pylori）的脲酶活性是其定植與致病的關(guān)鍵標(biāo)志物。成都邁睿可生物針對科研場景開發(fā)了多維度脲酶檢測技術(shù)體系，覆蓋酶活性定量、基因表達(dá)分析及原位定位檢測，助力細(xì)菌致病機制研究、抑制劑篩選及臨床前藥物評價。

2. 檢測方法與技術(shù)參數(shù)

（1）脲酶活性定量檢測（分光光度法）

原理：通過尿素分解產(chǎn)物（NH?/CO?）的比色反應(yīng)定量活性。

技術(shù)優(yōu)化：

檢測限：0.01 U/mL（靈敏度提升10倍 vs 傳統(tǒng)酚紅法）

線性范圍：0.02-5 U/mL（R2>0.99）

樣本兼容性：細(xì)菌培養(yǎng)液、胃黏膜組織勻漿、小鼠模型胃內(nèi)容物

（2）熒光探針法（實時動態(tài)監(jiān)測）

核心試劑：

特異性熒光底物（如pH敏感的HPF探針）

抗干擾緩沖液（消除胃酸環(huán)境pH波動影響）

檢測參數(shù)：

激發(fā)/發(fā)射波長：490/520 nm

動態(tài)檢測時長：0-60 min（間隔5 min讀數(shù)）

（3）分子檢測（qPCR/基因編輯驗證）

靶基因：脲酶基因簇（ureA/B/I）

服務(wù)內(nèi)容：

基因表達(dá)量檢測（ΔΔCt法）

CRISPR敲除株構(gòu)建（驗證脲酶功能依賴性）

3. 服務(wù)流程與技術(shù)優(yōu)勢

（1）標(biāo)準(zhǔn)化實驗流程

（插入流程圖：樣本預(yù)處理→活性/基因檢測→數(shù)據(jù)建模→報告交付）

樣本處理：

細(xì)菌純培養(yǎng)：離心收集菌體，裂解提取粗酶液

組織樣本：液氮研磨+超聲破碎（保留酶活性）

檢測執(zhí)行：

分光光度法：37℃反應(yīng)30 min，測定A570 nm吸光度

熒光法：酶標(biāo)儀實時監(jiān)測熒光強度變化

數(shù)據(jù)分析：

計算脲酶比活性（U/mg蛋白）

動力學(xué)曲線擬合（米氏常數(shù)Km/Vmax分析）

（2）技術(shù)優(yōu)勢對比

指標(biāo)邁睿可方案常規(guī)方案

檢測靈敏度0.01 U/mL0.1-0.5 U/mL

抗干擾能力胃酸模擬液誤差<5%誤差>20%

檢測通量96孔板高通量（50樣本/批次）單樣本檢測

多方法聯(lián)用活性+基因+定位三模塊整合單一方法

4. 應(yīng)用案例展示

案例1：幽門螺桿菌抑制劑篩選

客戶需求：評估天然化合物Z對臨床分離株的脲酶抑制效果

實驗設(shè)計：

濃度梯度：0-200 μg/mL（6個梯度）

檢測方法：分光光度法+熒光實時監(jiān)測

結(jié)果交付：

IC50值：48.3 μg/mL（95%CI: 42.7-54.1）

抑制動力學(xué)：非競爭性抑制（Lineweaver-Burk圖）

基因表達(dá)驗證：ureB mRNA下調(diào)2.8倍（qPCR）

（插入動力學(xué)曲線與抑制率柱狀圖，標(biāo)注：200 μg/mL組活性降低82%）

5. 服務(wù)套餐與交付內(nèi)容

服務(wù)類型檢測內(nèi)容周期價格

基礎(chǔ)套餐脲酶活性定量（分光光度法）3-5天

高級套餐活性+基因表達(dá)聯(lián)合分析7-10天

定制套餐抑制劑高通量篩選（96孔板）按需報價聯(lián)系客服

交付標(biāo)準(zhǔn)：

原始數(shù)據(jù)（酶活性單位、熒光動力學(xué)曲線、Ct值）

統(tǒng)計分析報告（含IC50、Km值、顯著性差異標(biāo)注）

實驗條件記錄（溫度、pH、樣本處理參數(shù)）

6. 售后服務(wù)與技術(shù)支持

? 免費預(yù)實驗設(shè)計：根據(jù)菌株類型（標(biāo)準(zhǔn)株/臨床株）推薦檢測方案

? 數(shù)據(jù)深度解析：提供酶動力學(xué)數(shù)學(xué)模型（如Hill系數(shù)計算）

? 菌株保藏服務(wù)：檢測后樣本可低溫寄存（-80℃，3個月）

? 保密協(xié)議：保障客戶化合物結(jié)構(gòu)與實驗數(shù)據(jù)安全

7. 訂購信息

核心優(yōu)勢總結(jié)

?? 高精度檢測：0.01 U/mL靈敏度，適用于低豐度樣本

?? 多維度驗證：活性、基因、表型數(shù)據(jù)聯(lián)動分析

?? 科研級支持：博士團(tuán)隊提供酶動力學(xué)建模與機制解析

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