脂質體2000說明書

描述

脂質體2000是專門用于將核酸轉染進入真核細胞的一種形式，我們提供下列的建議：

在多種細胞和培養(yǎng)板中都有很高的轉染效率。在網(wǎng)上列出的細胞類型中都獲得了較高的轉染效率。

核酸-脂質體2000的復合物可以直接加入到細胞培養(yǎng)液中，無論是有血清還是無血清的情況。

轉染之后不用移除復合物或者更換培養(yǎng)液，但是復合物應在轉染后4-6h移除。

轉染的一些重要指導

DNA轉染使用page3

我們建議使用Opti-MEM I reduced serum  培養(yǎng)基來稀釋脂質體2000和核酸。

轉染時不要向培養(yǎng)基中加入抗生素。

在實驗過程中要保持一樣的條件

DNA轉染

使用下列方法在24孔板內(nèi)轉染DNA進入哺乳動物細胞。對于其他的板子，可以參考page4.所有的數(shù)量和體積都是基于一個孔的劑量。準備復合物使DNA（ug）：脂質體（ul）的比例為1:2到1:3。轉染時細胞密度較高可以獲得高的效率，高的表達水平，以及使毒性降低。條件的選擇很重要。

1. 貼壁細胞：在轉染前一天，向24孔板內(nèi)接種0.5-2*105個細胞，使得細胞在轉染時融合率達到90-95%。切記使用不含抗生素的培養(yǎng)基。
2. 對于每一個轉染樣品，按照如下方法準備復合物：
   • 使用無血清的培養(yǎng)基將DNA稀釋為50ul，溫和混勻。
   • 使用前混勻脂質體2000，然后用培養(yǎng)基將一定量的脂質體2000稀釋為50ul。室溫孵育5min。

進行到c時間不超過25min

    C．5min的孵育后，混合稀釋的DNA和稀釋的脂質體2000（總體積為100ul）。溫和混勻，室溫孵育20min（溶液呈現(xiàn)云霧狀）。

       混合物在室溫可穩(wěn)定存在6h。

1. 向含有細胞和培養(yǎng)液的板子中每孔加入100ul的復合物，通過敲打板子和來回晃動使其混合均勻。
2. 細胞孵育18-48h后可檢測轉染情況。培養(yǎng)液可在轉染4-6h后更換。
3. 對穩(wěn)定的細胞系：傳代細胞在轉染后以1:10的比例加入新鮮的培養(yǎng)液。第二天加入選擇培養(yǎng)基。

優(yōu)化轉染

為了獲得高的轉染效率和低毒性，通過調整細胞濃度和DNA:脂質體2000的比例來優(yōu)化轉染條件。確保細胞90%的融合，以及DNA(ug)：脂質體（ul）比例在1:0.5到1:5。

轉染條件的浮動

  轉染到不同類型的培養(yǎng)板中，脂質體2000的，核酸的量，細胞數(shù)以及合適的培養(yǎng)基量，都在下表中顯示。在96孔板中，建議總體積到50ul