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四大因素,從源頭解析Duplication導(dǎo)語(yǔ):測(cè)序技術(shù)面世至今發(fā)生了諸多的技術(shù)革新,經(jīng)歷了sanger測(cè)序?yàn)榇淼牡凇鷾y(cè)序、高通量為代表的第二代測(cè)序和單分子實(shí)時(shí)測(cè)序?yàn)榇淼牡谌鷾y(cè)序。迄今為止,高通量測(cè)序(nextgenerationsequencingNGS)技術(shù)日趨成熟,正式進(jìn)入臨床疾病診療階段,與我們生活息息相關(guān)。Dup背景解讀高通量測(cè)序檢驗(yàn)流程可分為“實(shí)驗(yàn)室操作”(又稱為“濕實(shí)驗(yàn)”)和“生物信息學(xué)分析”(又稱“干實(shí)驗(yàn)”)兩部分。對(duì)應(yīng)的實(shí)驗(yàn)操作部分,可點(diǎn)擊高通量建庫(kù)了解。生物信息學(xué)主要
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漲知識(shí)!對(duì)于PCR你真的知道么?PCR技術(shù)作為分子生物學(xué)基礎(chǔ)的研究方法之一。20世紀(jì)80年代凱利·穆利斯發(fā)明第—代PCR技術(shù)以來(lái),“變性、退火、延伸”三部曲從未停歇。歷經(jīng)三十多年的演變,PCR技術(shù)已衍生出眾多變體。小翊總結(jié)了一代PCR的一些常見(jiàn)類型,助力您的科學(xué)研究。常規(guī)PCR常規(guī)PCR一般是由TaqDNA聚合酶介導(dǎo)的PCR反應(yīng),操作較為簡(jiǎn)便,產(chǎn)物帶有A尾。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳對(duì)終產(chǎn)物進(jìn)行定性和半定量分析。兼容樣本范圍廣,但保真性低,主要應(yīng)用于常規(guī)重組質(zhì)粒驗(yàn)證和基因型鑒定等方面。常規(guī)PCR產(chǎn)品產(chǎn)品
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探秘細(xì)胞凋亡過(guò)程——實(shí)用檢測(cè)方法盤(pán)點(diǎn)背景圖1:細(xì)胞凋亡與壞死過(guò)程細(xì)胞壞死(necrosis)是因?yàn)椴±矶a(chǎn)生的被動(dòng)死亡,如物理性或化學(xué)性的損害因子及缺氧與營(yíng)養(yǎng)不良等均導(dǎo)致細(xì)胞壞死。表現(xiàn)為細(xì)胞脹大、胞膜破裂、細(xì)胞內(nèi)容物外溢、核變化較慢、DNA降解不充分和引起嚴(yán)重的局部炎癥反應(yīng)等。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同,細(xì)胞凋亡(Apoptosis)一般是指機(jī)體細(xì)胞在發(fā)育過(guò)程中或在某些因素作用下通過(guò)細(xì)胞內(nèi)基因及其產(chǎn)物的調(diào)控而發(fā)生的一種程序性細(xì)胞死亡過(guò)程,細(xì)胞壞死是細(xì)胞受到強(qiáng)烈理化或生物因素作用引起細(xì)胞無(wú)序變化的死亡
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膠原酶——?jiǎng)游锝M織消化利器圖1:膠原酶產(chǎn)品介紹膠原酶(Collagenase)是一類能夠特異性的識(shí)別Pro-X-Gly-Pro序列(該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中,很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中),并切割該序列中的中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之間的肽鍵的肽鏈內(nèi)切酶,且能夠水解結(jié)締組織中的膠原蛋白。許多蛋白酶都能水解單鏈和變性的膠原多肽,但膠原酶是唯——種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶,其廣泛存在結(jié)締組織內(nèi),其中有效的膠原酶是由厭氧細(xì)菌溶組織梭菌(Clostridiumhistolytic
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RT-qPCR需要注意的那些事,你都了解嗎?在RT-qPCR實(shí)驗(yàn)中不論是實(shí)驗(yàn)小白,都會(huì)遇到各種不同的實(shí)驗(yàn)問(wèn)題。解決問(wèn)題不僅要浪費(fèi)額外的樣品和試劑,還要占用大量的時(shí)間一遍遍的重復(fù)和分析,真是被實(shí)驗(yàn)折磨得焦頭爛額。那實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)該注意哪些細(xì)節(jié)呢?小翊精心為大家總結(jié)了RT-qPCR實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng),希望助小伙伴們一臂之力。RT-qPCR實(shí)驗(yàn)包括RNA提取與質(zhì)量評(píng)估,逆轉(zhuǎn)錄和qPCR三大步驟,每個(gè)步驟都有很多注意事項(xiàng),才能做出可靠的數(shù)據(jù)。下面由小翊給您詳細(xì)介紹。RNA質(zhì)量評(píng)估在RT-qPCR實(shí)驗(yàn)中,RNA
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NGS在病原微生物檢測(cè)中的應(yīng)用背景相關(guān)由病原微生物引起的感染性疾病是臨床面臨的常見(jiàn)的疾病之一,并且隨著人群結(jié)構(gòu)變化、環(huán)境污染以及藥物濫用等因素的影響,病原體呈現(xiàn)多樣化和復(fù)雜化的趨勢(shì),逐步威脅人類健康。隨著測(cè)序技術(shù)的飛速發(fā)展,NGS已逐步應(yīng)用于感染性疾病的診斷、治療和監(jiān)測(cè),在病原微生物鑒定、分型、耐藥突變檢測(cè)及新型病原體鑒定方面有其*的優(yōu)勢(shì)。病原微生物檢測(cè)現(xiàn)狀快速準(zhǔn)確的診斷可以對(duì)病情進(jìn)行監(jiān)控,提供有效治療,控制疾病的蔓延。目前常用的病原微生物分子檢測(cè)方法主要有:PCR技術(shù)(包括常規(guī)PCR以及qPC
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NGS在腫瘤檢測(cè)中的那些事兒一、背景介紹20世紀(jì)以來(lái),癌癥已成為困擾人類健康的主要危害之一。根據(jù)2019年國(guó)家癌癥中心發(fā)布的2015年全國(guó)//////新癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù),2015年惡性腫瘤發(fā)病約392.9萬(wàn)人,死亡約233.8萬(wàn)人。平均每天超1萬(wàn)人被確診為癌癥,每分鐘7.5個(gè)人確診癌癥。癌癥負(fù)擔(dān)呈持續(xù)上升態(tài)勢(shì),近10多年來(lái),惡性腫瘤發(fā)病率每年保持約3.9%的增幅,死亡率每年保持2.5%的增幅。因而腫瘤基因突變檢測(cè)對(duì)指導(dǎo)腫瘤靶向治療、耐藥監(jiān)測(cè)及預(yù)后判斷有重要意義。圖1:中國(guó)2015年惡性腫瘤發(fā)病與死亡
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干貨分享|磁珠常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案高通量測(cè)序技術(shù)的跨越式發(fā)展,使測(cè)序能力大幅上升。在整個(gè)NGS工作流程中,磁珠是*的產(chǎn)品。磁珠通過(guò)磁顆?;钚曰鶊F(tuán)在一定條件下可與核酸結(jié)合和解離的原理,將樣本中目的片段分離。可實(shí)現(xiàn)對(duì)核酸樣本的高通量自動(dòng)化操作,廣泛應(yīng)用于基因測(cè)序以及分子診斷領(lǐng)域??雌饋?lái)很簡(jiǎn)單的純化/分選實(shí)驗(yàn),卻在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中有各種意外的情況。那關(guān)于磁珠產(chǎn)品選擇和產(chǎn)品使用方面有什么需要注意的事項(xiàng)呢?接下來(lái)小翊將從磁珠的外觀、儲(chǔ)存、應(yīng)用和使用效果逐一對(duì)癥分析,希望能幫助大家了解磁珠實(shí)驗(yàn)中的那些事。磁珠外觀Q