實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，由于該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前已得到廣泛應(yīng)用。 實(shí)時(shí)熒光定量PCR：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，Z后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

定量（Absolute Quantification，AQ）

分析用于確定未知樣本中某個(gè)核酸序列的量值，即通常所說的拷貝數(shù)，應(yīng)用與病原體檢測，轉(zhuǎn)基因食品檢測，及基因表達(dá)研究。

SYBR Green特性：

（1）只有和雙鏈DNA結(jié)合后才發(fā)熒光。

（2）變性時(shí)，DNA雙鏈分開，無熒光。

（3）在延伸結(jié)束階段采集熒光信號。

（4）SYBR Green也能和非特異性的雙鏈DNA結(jié)合發(fā)光，所以必須在反應(yīng)結(jié)束時(shí)做熔解曲線分析。 

TaqMan探針的特性：

（1）5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM、VIC等 

（2）3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) （Quencher, Q）

（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針。

定量的標(biāo)準(zhǔn)樣品：

（1）含有和待測樣品相同擴(kuò)增片段的克隆質(zhì)粒

（2）含有和待測樣品相同擴(kuò)增片段的cDNA

（3）PCR的產(chǎn)物，可分別做系列稀釋。

服務(wù)流程：

步驟	客 戶 提 供	服 務(wù) 內(nèi) 容	基 屹 提 供
1	新鮮的且盡量多的材料；已知的全長基因序列；盡可能詳細(xì)的背景資料：DNA/ RNA來源、豐度等。	DNA/RNA提取，根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)特異性的引物和熒光探針。
2	純化好的DNA/RNA（大于5 ug/樣品）；已知的全長基因序列；盡可能詳細(xì)的背景資料：DNA/ RNA來源、豐度等。	根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)特異性的引物和熒光探針。
3		以DNA為模板，對目的基因進(jìn)行熒光定量PCR檢測分析	提供完整的定量分析結(jié)果、實(shí)驗(yàn)熒光定量擴(kuò)增曲線及詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟。

注意：客戶可根據(jù)所能提供的起始材料不同，選擇從步驟1或2啟動(dòng)項(xiàng)目。