| I. Background | |
| STING（干擾素基因刺激因子）又稱 MPYS、TMEM173、MITA 和 ERIS，是一種跨膜蛋白，是環(huán)狀二核苷酸（CDN）的直接傳感器。CDN 是細(xì)菌信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中普遍存在的第二信使分子，是哺乳動物細(xì)胞的防御觸發(fā)器。當(dāng)細(xì)菌病原體攻擊時，釋放到細(xì)胞中的 CDN 直接與 STING 結(jié)合，激活的 STING 和 TANK 結(jié)合激酶-I (TBK1) 相互作用以誘導(dǎo)活性干擾素調(diào)節(jié)因子 (IRF3) 二聚體，然后該二聚體與細(xì)胞核中的干擾素刺激反應(yīng)元件 (ISRE) 結(jié)合并導(dǎo)致 IFN-α/β 的產(chǎn)生。IFNβ 的產(chǎn)生是 STING 活化的標(biāo)志。腫瘤微環(huán)境（TME）中由于天然免疫產(chǎn)生的信號傳導(dǎo)是導(dǎo)致腫瘤特異性 T 細(xì)胞激活和腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞（TIL）浸潤的關(guān)鍵因素。其中尤其以 I 型 IFN 對腫瘤特異性 T 細(xì)胞的活化最為關(guān)鍵。因此，STING 激動劑可以通過誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素基因的表達(dá)，激活包括樹突狀細(xì)胞等免疫刺激細(xì)胞，改變腫瘤微環(huán)境并誘導(dǎo)腫瘤特異性 T 細(xì)胞的產(chǎn)生，從而通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)達(dá)到抗腫瘤的目的。 | |
| II. Description | |
針對 STING 激動劑和拮抗劑的藥物發(fā)現(xiàn)，利用 STING 蛋白調(diào)控干擾素（interferon，IFN）及其下游基因表達(dá)的原理，在 THP-1細(xì)胞上構(gòu)建了 2個誘導(dǎo)型的報告基因系統(tǒng)：一個是干擾素刺激反應(yīng)元件（ISRE），下游接入 Luc 的分泌型熒光素酶，可以在底物的刺激下，催下產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號，該報告基因可以評估 IFR通路，比如 type I IFNs and RLR (RIG-I-like receptor), CDS (cytosolic dsDNA sensor) or STING agonists；另外一個是 NFκB 通路，下游接入分泌型胚胎堿性磷酸酶(SEAP)報告基因，可以響應(yīng)與 NFκB 通路相關(guān)的一些刺激。ISRE-Luc NFκB-SEAP THP-1 報告基因藥靶模型很好地模擬信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。 Figure 1. ISRE-Luc NFκB-SEAP THP-1 細(xì)胞模型原理圖 | |
| III. Introduction | |
| Host Cell: | THP-1 |
| Expressed gene: | ISRE |
| Stability: | 32 passages (in-house test, that not means the cell line will be instable beyond the passages we tested.) |
| Synonym(s): | NF-kB reporter, NFkappaB reporter, luciferase reporter, NF-kB reporter, NFkB reporter, nfkb thp1, thp1, NF-kB, nfkb, nf-kb |
| Freeze Medium: | 90% FBS+10% DMSO |
| Culture Medium: | RPMI-1640+ 10% heat-inactivated fetal bovine serum+100 μg/ml Normocin+10 µg/ml blasticidin+100 ug/ml Zeocin |
| Mycoplasma Testing: | Negative |
| Storage: | Liquid nitrogen |
| Application(s): | Functional(Report Gene) Assay |
| IV. Description of Host Cell Line | |
| Organism: | Homo sapiens, human |
| Tissue: | Peripheral blood |
| Disease: | Acute monocytic leukemia |
| Morphology: | Monocyte |
| Growth Properties: | Suspension |
| Ⅴ. Representative Data | |
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Figure 2. STING Stimulation Assay 驗(yàn)證結(jié)果
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