一、Oligo高通量DNA合成儀用于合成結(jié)構(gòu)上類似DNA或RNA的寡核苷酸的自動化儀器。一般應(yīng)用于固相合成法，每次將一個核苷酸加到所接長的寡核苷酸鏈上，加入每一個核苷酸都利用相同的化學(xué)反應(yīng)與相應(yīng)的嘌呤或嘧啶堿基衍生物作用。

二、Oligo高通量DNA合成儀的特點：

（1）包括一個靈活的合成協(xié)議編輯器，它允許操作員修改所包含的協(xié)議，并將它們保存在一個新名稱下，或者從頭開始編寫協(xié)議。協(xié)議編輯可以在Excel中完成。對于不同的合成規(guī)模和序列長度，很容易編輯特殊協(xié)議。比如，可以給耦合緩慢的堿基對一個特別的延長的耦合時間。如果必要的話，可以給所有單體額外的耦合反應(yīng)時間。

（2）軟件簡單易用。在計算機或平板的Excel表中創(chuàng)建運行數(shù)據(jù)后，可使用Wi-Fi等網(wǎng)絡(luò)連接或標(biāo)準(zhǔn)U盤傳輸?shù)絻x器上。實驗運行中，可以從PC端收集實驗數(shù)據(jù)監(jiān)測實驗結(jié)果。

（3）性能：

OligoMakerX12可以在1小時內(nèi)平行合成12條20對的寡核苷酸。  

OligoMaker48可以在2小時內(nèi)平行合成多達(dá)48條20對的寡核苷酸。  

OligoMaker96可以在3小時內(nèi)平行合成多達(dá)96條20對的寡核苷酸。  

OligoMaker192可以在4小時內(nèi)平行合成多達(dá)192條20對的寡核苷酸。  

（4）可在IUPAC-IUB標(biāo)準(zhǔn)規(guī)則下合成10、50、200和1000nmol規(guī)模的核苷酸。  

（5）兩個反應(yīng)盤，一個盤可以加載和合成核苷酸，另一個盤準(zhǔn)備進(jìn)行凈化步驟。  

OligoMaker48可以升級為OligoMaker96和OligoMaker192；  

OligoMaker96可以升級為OligoMaker192。  

（6）DNA的固相合成。即DNA3'端固定于基質(zhì)上，然后沿3'向5'方向依此添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于應(yīng)用DNA聚合酶的DNA合成。

三、合成過程：

*個堿基的3‘末端固定在樹脂上，下一個堿基的5’-OH用二對甲氧三苯甲基DMT保護，堿基上的氨基用苯甲酸保護，然后對3‘-OH用氨基磷酸化合物進(jìn)行活化。

1。1個堿基的5’-OH和下個堿基的3‘-OH形成亞磷酸三酯，  

2。然后用碘氧化成磷酸三酯  

3。加入C2H6CL2除去第二個堿基5’-OH上的保護劑DMT循環(huán)進(jìn)行加入下一個堿基合成完畢后  

四、亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟。亞磷酰胺DNA合成的試劑有：保護堿基的5／—DMT，A、G、C、T亞磷酰胺單體，四唑偶聯(lián)催化劑，乙酐，N—甲基咪唑封閉試劑，TCA脫保護溶液，12氧化混合物，乙腈清洗溶劑，氨水切除溶液。

五、使用步驟如下：

1、仔細(xì)檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量，必要時換掉試劑瓶，特別注意乙腈的量，因為該溶劑用量較大。  

2、將標(biāo)記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。  

3、將要合成的DNA序列輸入合成儀。  

4、檢查選擇的合成步驟是否正確。  

5、選擇結(jié)束方法：TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài)，若打算以5，—DMT基團連接純化寡核苷酸，將其轉(zhuǎn)變?yōu)門ritylOnAuto結(jié)束狀態(tài)。  

6、選擇結(jié)束方法，一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。  

7、在每個柱監(jiān)視器的Username下，輸入你所希望的保存名字。  

8、以代碼代替相應(yīng)的DNA序列標(biāo)記每一個收集瓶。  

9、打印出每一個柱設(shè)置的詳細(xì)資料。  

10、檢查打印出來的資料是否正確。  

11、運行StartColumn步驟檢查每一個柱的位置，確保合成儀上合成柱處于正確的位置。  

12、檢查連接在合成儀上的溶劑殘留（廢液瓶）是否充滿。  

13、如果分部收集器用來收集每個DMT脫保護步驟的流出物，確保試管充分清潔干凈，并打開分部收集器，確保DMT廢液管路通向分部收集器。  

14、啟動循環(huán)，運行開始程序清洗試劑管路，除去原來的試劑。

六、注意：TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT，并將其從固相載體上切下來，儲存在收集瓶中；TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸沒有保護基團，將其從固相載體上切下來，儲存在收集瓶中；TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT，寡核苷酸沒有從固相載體上切下來，而是保留在合成柱中；TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸沒有保護基團，寡核苷酸沒有從固相載體上切下來，而是保留在合成柱中。