目錄:愛必信（上海）生物科技有限公司>>細胞生物學>>細胞檢測>> abs50199Fluo-8免洗細胞鈣流檢測試劑盒
| 供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 100T |
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| 貨號 | abs50199 | 主要用途 | 鈣流檢測 |
| 描述 | 許多細胞內重要生物反應涉及到鈣流。檢測細胞內瞬間鈣流變化對細胞內生物反應的研究及靶向藥物研發(fā)至關重要。鈣特異性結合熒光染料法是檢測細胞內鈣流的常用的手段。 Fluo-8 作為新一代鈣流檢測染料提高了細胞裝載和鈣反應，同時保持了 Fluo-3 和Fluo-4 光譜波長 Ex/Em≈490/520 nm。Fluo-8 AM 可以在室溫下裝載到細胞中，而 Fluo-3 AM 和Fluo-4 AM 需要37°C 進行細胞裝載。此外，F(xiàn)luo-8 AM 比 Fluo-4 AM 亮兩倍，比 Fluo-3AM 亮四倍。 鈣流染料在細胞裝載及鈣流分析中常需要進行細胞洗滌，這顯著增加了檢測中的工作流程，由于一些細胞可以在洗滌過程中脫落，這也增加了分析中數(shù)據(jù)變量。因此，免洗染料及方法是現(xiàn)在的發(fā)展趨勢。為了減少染料被細胞轉運到細胞外，陰離子轉移蛋白抑制劑需要加到染料加載溶液及后續(xù)的分析溶液中。 產(chǎn)品特點： 1、免洗 在整個分析過程中，不需要經(jīng)過細胞洗滌過程。細胞洗滌可以降低細胞本底熒光，但增加了操作步驟，增加了細胞脫落及孔間差異風險。 2、更高的靈敏度 Fluo-8熒光強度比Fluo-3，F(xiàn)luo-4強。 3、檢測方便 Fluo-8可以用與Fluo-4相同的檢測儀器及熒光通道。針對某種細胞的具體實驗參數(shù)，如細胞密度，溫度，體積，時間，儀器收集及分析設定等，需通過預實驗確定。 4、適合于高通量檢測 反應可以在96孔或384孔板上進行，滿足一次同時進行大批量的微孔板實驗需求。 產(chǎn)品組成： 試劑盒內容包括 Fluo-8 試劑及緩沖液，分別灌裝于 1 mL 螺旋管，及 10 mL 或100 mL 的棕色瓶中，規(guī)格如下：
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| 使用方法 | 1、細胞準備： （1）正常培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞消化后，加培養(yǎng)基，細胞計數(shù)，取需要的細胞總數(shù)，離心。以下是按 96 孔板的建議用量，384 板需要的細胞數(shù)及體積，對應調整。96 孔培養(yǎng)板一般建議每孔細胞 20,000 左右。 （2）用 Hank’s 鹽溶液或類似無酚紅培養(yǎng)液，加胎牛血清至 1%濃度，用該培養(yǎng)液重新懸浮上述離心后的細胞。然后鋪細胞于培養(yǎng)板，每孔 50 uL。細胞培養(yǎng) 3-5 小時至貼壁或過夜。 2、染料裝載： （1）取出緩沖液在室溫平衡 30 分鐘，顛倒混勻幾次。如果緩沖液注明是 10x 濃縮液，需要用去離子水稀釋成 1x 的工作緩沖液。 （2）取出 Fluo-8 試劑，室溫平衡 5-10 分鐘，離心將管內容物集中于管底。如果試劑不是一次性用完，可以對試劑進行分裝，分裝后的 Fluo-8 試劑繼續(xù)-20℃保存，減少凍融次數(shù)。注意避光。 （3）計算好需要的染料裝載液體積，按每孔 50 uL 計算。將 Fluo-8 試劑加于1x 的工作緩沖液，充分混勻。Fluo-8 試劑用量建議起始按 1:100 稀釋到工作緩沖液中，稀釋度可根據(jù)不同細胞株及需求調整。 （4）計算需要的儲存液體積，加入到上述 Fluo-8 工作緩沖液中，充分混勻，此為裝載液。 （5）吸去培養(yǎng)板孔中的培養(yǎng)液，將裝載液加到細胞培養(yǎng)板孔，每孔 50 uL。輕輕振搖10 秒鐘，加蓋，37℃ 培養(yǎng) 1 小時。 3、細胞內鈣流檢測： （1）準備化合物及激動劑：激動劑建議不少于 6 個濃度梯度。每反應板設立未加激動劑或化合物的對照孔。激動劑/化合物板每孔 100-200 uL體積。 （2）準備與檢測儀配套的專用移液槍頭盒。 （3）準備檢測緩沖液：檢測緩沖液是加了的 Hank’s 鹽緩沖液。 （4）吸去培養(yǎng)板孔中的染料裝載液，每孔加檢測緩沖液 100 uL。 （5）設定好儀器檢測程序及各相關參數(shù)，檢測波長為 490/525nm，每 1-3 秒讀1 次，連續(xù)讀2 分鐘。 （6）在加激動劑/化合物前讀取一次基礎讀數(shù)。 （7）設定好化合物/激動劑板孔及槍頭與實驗細胞的對應位置。 （8） 啟動加激動劑/化合物的檢測程序，收集實驗數(shù)據(jù)。 （9）用（F-F0)/F0 *100%的方法或其它被驗證的方法進行數(shù)據(jù)處理分析。 | |||||||||||||||
| 性能 | ||||||||||||||||
| 儲存/保存方法 | 未開封的緩沖液儲存于 4℃，使用前需要取出在室溫平衡 30 分鐘，顛倒混勻幾次。分裝的緩沖液或 1 x 工作液可儲存于室溫（22℃）1 周。Fluo-8 試劑儲存在-20℃ 或-80℃性能穩(wěn)定1 年。 |
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