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  • 真核表達(dá)細(xì)胞表達(dá)外源基因的意義

    真核表達(dá)細(xì)胞區(qū)別于原核細(xì)胞主要在于有細(xì)胞核,核內(nèi)遺傳物質(zhì)由核膜將其與細(xì)胞的其他成分隔開。真核細(xì)胞的遺傳物質(zhì)主要存在于細(xì)胞核內(nèi),細(xì)胞內(nèi)的其他細(xì)胞器如線粒體和葉綠體等也含有少量遺傳物質(zhì)。真核表達(dá)是近年來常用的一種表達(dá)重組蛋白的手段,它補(bǔ)充了一些原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)中所缺乏的功能,例如真核表達(dá)時能夠形成穩(wěn)定的二硫鍵,在蛋白經(jīng)過翻譯后可對蛋白進(jìn)行正確修飾,使表達(dá)出來的蛋白更具天然活性而不是被降解或者是形成包涵體;利用真核表達(dá)系統(tǒng)可以誘導(dǎo)高效表達(dá),加快了人們對基因研究以及藥物研究的進(jìn)程。真核表達(dá)細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)是哪些
  • 抗體純化該如何選擇重組蛋白A/蛋白G/蛋白L?

    親和層析是利用生物分子間專一的親和力而進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)??贵w與抗原、激素與受體、酶與底物等這些生物大分子之間因存在這種特異性親和力,常常一種分子作為配基,制備成親和層析介質(zhì),用來純化對應(yīng)的目標(biāo)分子,這種方法稱為親和層析法。具體來講,親和層析法即是將配基固定于惰性載體上,混合物中的目標(biāo)蛋白與配基特異性結(jié)合,從而被捕獲,無關(guān)的雜質(zhì)組分隨著流動相被沖洗下來,然后選擇合適的洗脫液講目標(biāo)蛋白從載體上洗脫下來,從而得到單一組分的純化物質(zhì)??贵w親和層析蛋白A、蛋白G和蛋白L是科學(xué)家陸續(xù)發(fā)現(xiàn)能夠與抗體進(jìn)行
  • 表明重組人干擾素α2b不能再使用的現(xiàn)象有哪些?

    重組人干擾素α2b具有廣譜抗病毒作用,其抗病毒機(jī)制主要通過干擾素同靶細(xì)胞表面干擾素受體結(jié)合,誘導(dǎo)靶細(xì)胞內(nèi)2-5(A)合成酶、蛋白激酶PKR、MX蛋白等多種抗病毒蛋白,阻止病毒蛋白質(zhì)的合成、抑制病毒核酸的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄而實(shí)現(xiàn)。更是一種抗病毒的藥物,主要用于體內(nèi)的病毒的感染,或者是提高人體的自身的免疫能力的,對于人體的很多疾病都有著很重大的作用。重組人干擾素應(yīng)于避光、干燥、于2-8度保存。有效期18個月。表明重組人干擾素α2b不能再使用的現(xiàn)象有:本品凍干制劑為白色疏松體,溶解后為無色透明液體,如遇有渾濁
  • 真核表達(dá)細(xì)胞與原核表達(dá)的區(qū)別有哪些

    真核表達(dá)細(xì)胞和原核變達(dá)的區(qū)別:真核表達(dá):常用酵母、昆蟲、動物和哺乳動物細(xì)胞。其優(yōu)點(diǎn)是根據(jù)原核生物蛋白與靶DNA的高度特異性相互作用而設(shè)計(jì),不存在基因的非特異性激活或抑制。它可以誘導(dǎo)高達(dá)105倍的高效基因表達(dá)??梢試?yán)格控制基因表達(dá)。原核表達(dá):它的優(yōu)點(diǎn)是可以在短時間內(nèi)獲得基因表達(dá)產(chǎn)物,而且成本相對較低。方法也簡單,可以表達(dá)的蛋白質(zhì)也很多。但缺點(diǎn)是表達(dá)的蛋白質(zhì)沒有經(jīng)過修飾,不一定具有天然活性,表達(dá)系統(tǒng)不能調(diào)節(jié)表達(dá)時間和表達(dá)水平。一些基因的持續(xù)表達(dá)會對宿主細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用,過度表達(dá)可能導(dǎo)致非生理反應(yīng)。目
  • 哺乳動物瞬時表達(dá)系統(tǒng)與其它系統(tǒng)相比怎樣?

    哺乳動物瞬時表達(dá)是適用于生成具有天然結(jié)構(gòu)和活性的哺乳動物蛋白的選用表達(dá)平臺,可以實(shí)現(xiàn)高水平的翻譯后加工,使蛋白質(zhì)獲得最佳功能活性,適合在最類似生理學(xué)的環(huán)境中研究特定蛋白質(zhì)的功能。它常用于抗體和治療性蛋白質(zhì)以及人類功能細(xì)胞分析的蛋白質(zhì)表達(dá)。哺乳動物瞬時表達(dá)系統(tǒng)與其它系統(tǒng)相比,該系統(tǒng)的優(yōu)勢在于能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)的正確折疊,提供復(fù)雜的N型糖基化和準(zhǔn)確的O型糖基化等多種翻譯后加工功能,因而表達(dá)產(chǎn)物在分子結(jié)構(gòu)、理化特性和生物學(xué)功能方面接近天然高等生物蛋白質(zhì)分子。哺乳動物瞬時表達(dá)優(yōu)點(diǎn):1.重組DNA易轉(zhuǎn)染,遺傳
  • 重組人BMP4的分泌表達(dá)優(yōu)點(diǎn)

    重組人BMP4蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在零下八十℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因?yàn)槿芙獠缓脮档偷鞍椎男в?。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細(xì)注意。重組人BMP4蛋白真核表達(dá)與原核表達(dá)如何選擇:真核表達(dá):常用酵母、昆蟲、動物和哺乳動物細(xì)胞。其優(yōu)點(diǎn)是根據(jù)原核生物蛋白與靶DNA的高度特異性相互作用而設(shè)計(jì),不存在基因的非特異性激活或抑制。
  • 真核表達(dá)細(xì)胞啟動子介紹及作用分析

    真核表達(dá)細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn):重組DNA易轉(zhuǎn)染,遺傳穩(wěn)定,可重復(fù);識別和去除內(nèi)含子;進(jìn)行翻譯后修飾;磷酸化、糖基化、二硫鍵、寡聚體等的形成、高級結(jié)構(gòu)的正確折疊;產(chǎn)品的構(gòu)型正確率高,可被改造成類人體源性,免疫源性好;可分泌至培養(yǎng)基,提純工藝簡單,成本低;可用于基因治療。細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)能誘導(dǎo)高效表達(dá),對表達(dá)的蛋白進(jìn)行正確折疊,并進(jìn)行復(fù)雜糖基化修飾,蛋白活性接近于天然蛋白,不需去除內(nèi)毒素,周期較長,操作復(fù)雜,需要細(xì)胞房,無菌,成本投入高。真核表達(dá)細(xì)胞啟動子介紹及作用分析:RNA聚合酶(II)結(jié)合并起動轉(zhuǎn)錄的DNA
  • 重組人GDF3影響表達(dá)的因素和解決方法

    細(xì)胞因子是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì),具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫等多種功能。細(xì)胞因子是由多種細(xì)胞產(chǎn)生的,具有廣泛調(diào)節(jié)細(xì)胞功能作用的多肽分子,細(xì)胞因子不僅作用于免疫系統(tǒng)和造血系統(tǒng),還廣泛作用于神經(jīng)、內(nèi)分泌系統(tǒng),對細(xì)胞間相互作用、細(xì)胞的增殖分化和效應(yīng)功能有重要的調(diào)節(jié)作用。重組人GDF3重組要求:1.真實(shí)性:重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過N末端氨基酸序列分析;必要時應(yīng)用SDS-PAGE,RP-HPLC和質(zhì)譜(MS)檢測其真實(shí)性。2.純度:應(yīng)用兩種方法分析產(chǎn)品純度。3.生物
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