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供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	96T/盒
貨號	AK00004	應(yīng)用領(lǐng)域	生物產(chǎn)業(yè)

一、簡介

試劑盒用于直接檢測豬血清和血漿中豬瘟病毒抗體，評估豬瘟疫苗免疫狀況，感染豬的血清學(xué)診斷，是一種快速、

簡單、特異的檢測方法。

二、實驗原理

豬瘟病毒抗體阻斷 ELISA 是將重組 E2 糖蛋白包被在酶標(biāo)板上，加入樣品后，樣品中如果存在抗 E2 糖蛋白的抗體，

在加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗 E2 糖蛋白抗體以及顯色底物后，因抗體阻斷了抗 E2 糖蛋白抗體的結(jié)合，所以導(dǎo)致顏色

將不會加深。顏色的深淺與血清樣品中的抗 E2 糖蛋白特異抗體的量呈負相關(guān)。樣品的 OD 值同陽性對照以及陰性對照

比較后可得出血清樣品的阻斷率。

三、試劑盒內(nèi)容

四、自備材料

微量移液器(0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL)、一次性移液器吸頭、試管、蒸餾水或去離子水，酶標(biāo)儀，手

動或自動洗滌設(shè)備。

五、實驗準備

1. 試劑盒各個組分在使用前均須恢復(fù)至室溫（21℃±5℃），試劑應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)或振蕩均勻。

2. 用去離子水將濃縮洗滌液(10X)、濃縮稀釋液(10X)，進行 10 倍稀釋。

3. 取出包被的微量酶標(biāo)板，并做好陰、陽性對照品和樣品的加樣位置的標(biāo)記。

4. 準備動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

六、實驗過程

1.取準備好的血清按照以下方式進行加樣。

? 50 uL 陰性對照（NC）加入孔 A1 和 B1。

? 50 uL 陽性對照（PC）加入孔 C1 和 D1。

? 50 uL 待測樣本加入剩余其他孔。

2.輕輕振勻孔中樣品(注意勿溢出)，貼上封板膜，室溫（21℃±5℃）下孵育 2 h。

3.小心揭掉封板膜，棄去孔中液體，300uL 洗滌液清洗 2 次。每一次洗滌后，棄去孔中液體，最后一次清洗完

后，在吸干材料上用力拍干孔內(nèi)液體。在每一次洗滌和加入下一個試劑之前，避免孔壁變干，影響實驗結(jié)果。

4.濃縮酶標(biāo)記抗體（10X）用稀釋緩沖液（1X）進行 10 稀釋（1 份濃縮液+9 份稀釋緩沖液），吸取 100 uL 稀

釋好的酶標(biāo)抗體，加入孔中。

5.室溫(21℃±5℃)下孵育 30 min，倒掉孔中液體，300 uL 洗滌液清洗 3 次。

6.將底物 A 與底物 B 按照體積比例 1:1 混合，輕輕旋轉(zhuǎn)或振蕩均勻后吸取 100 uL 配置好的底物溶液，加入孔

中，避光孵育 20 min。(底物溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用)

7.吸取 50 uL 終止液加入孔中，終止反應(yīng)。

8.酶標(biāo)儀檢測條件設(shè)置成波長 450nm 進行讀數(shù)。

七、實驗有效性判斷

在下列情況下，即可判斷實驗有效：

?陰性對照平均 OD 大于 0.7 ODNC>0.7

?陽性對照平均 OD 小于陰性對照平均 OD 的 30% ODPC/ODNC<0.3

八、實驗結(jié)果判定

對每個樣品，進行阻斷率的計算：

九、注意事項

1.試劑盒各組分使用前，應(yīng)平衡至室溫，使用后放回各自保存溫度進行保存。

2.試劑盒開封后應(yīng)盡快使用，-20℃保存樣品應(yīng)避免進行反復(fù)凍融。

3.吸取液體時，應(yīng)盡量準確，防止產(chǎn)生氣泡。

4.應(yīng)嚴格按照各操作步驟規(guī)定的時間和溫度進行操作。

5.終止液可導(dǎo)致嚴重?zé)齻?。若接觸皮膚或眼睛，請立即用大量清水沖洗并就醫(yī)。

6.底物避免接觸光照和任何氧化劑

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