ToloScript RT SelectMix for qPCR 反轉(zhuǎn)錄酶

包含新一代逆轉(zhuǎn)錄酶 ToloScript Reverse Transcriptase （RTase）和針對逆轉(zhuǎn)錄優(yōu)化

的緩沖液，進(jìn)一步提高了 cDNA 合成的效率，適用于兩步法 qRT-PCR 反應(yīng)。試劑盒中可根據(jù)實驗需求選擇 Oligo

(dT)23VN、Random Primers 以及基因特異性引物為逆轉(zhuǎn)錄引物。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物兼容染料法與探針法 qPCR，可進(jìn)行基

因表達(dá)的高效分析。

產(chǎn)品組成

組分

22102-01

RNase-free ddH2O

2 × 1 mL

ToloScript RT SelectMix for qPCR 反轉(zhuǎn)錄酶

400 μL

Oligo (dT)23VN（10 μM）

100 μL

Random Primers (50 ng/μL)

100 μL

5 × No RT Control Mixb

40 μL

a. 包含 Buffer、dNTP、ToloScript RTase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo (dT)23VN primer mix。

b. 除不含 ToloScript RTase 外，其余成分與 5 × ToloScript qRT SelectMix 相同，用于配制 No RT 對照反應(yīng)。

保存條件

-20 ℃儲存。

ToloScript RT SelectMix for qPCR 反轉(zhuǎn)錄酶

質(zhì)量控制

純度檢測：所有組分經(jīng)檢測均無核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶及 RNase 殘留。

功能檢測：以 1 µg HeLa 細(xì)胞總 RNA 為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，通過 qPCR 檢測 4 個基因的表達(dá)量，Ct 值在批次間產(chǎn)

品中基本相同。在 1 µg HeLa 細(xì)胞總 RNA 中混入 100 ng 人 gDNA，經(jīng) 2-Step gDNA Erase-Out Mix 處理后加入 No

RT Control Mix，然后進(jìn)行 qRT-PCR，獲得的 Ct 值>40。

實驗流程

1. cDNA 的合成

在 RNase-free 的離心管中配置如下體系，用移液器輕輕吹打混勻。

5 × ToloScript qRT SelectMix

4 µL

Oligo (dT)23VN（10 μM）

or/and Random hexamers (50 ng/μL)

or Gene specific primers (2 μM)

1 μL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

RT SelectMix for qPCR

No RT Control 是指不加逆轉(zhuǎn)錄酶的陰性對照反應(yīng)，用于檢驗 RNA 模板中是否有 gDNA 殘留。

在 RNase-free 離心管中配制如下混合液，用移液器輕輕吹打混勻。

5 × No RT Control Mix

4 µL

Oligo (dT)23VN（10 μM）

or/and Random hexamers (50 ng/μL)

or Gene specific primers (2 μM)

1 μL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

2. 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

37 ℃*

15 min

85 ℃

5 sec

產(chǎn)物可立即用于 qPCR 反應(yīng)，或凍存于-20℃，并可在半年內(nèi)使用；如需長期存放，則建議將反轉(zhuǎn)錄 cDNA 產(chǎn)物分裝

后凍存于-80 ℃。cDNA 應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項

1. 由于 5 × ToloScript qRT SelectMix 及 5 × No RT Control Mix 中均含有高濃度的甘油，所以在使用前請

短暫離心，并輕彈（或用移液槍輕輕吸打混勻）后，準(zhǔn)確吸取。

2. 在 20 µL 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中建議加入不超過 1 µg 的 Total RNA。若目的基因的表達(dá)量非常低，則可以

多加入 5 µg 的 Total RNA；否則，如果加入 RNA 量過高，可能會超出后續(xù) qPCR 的線性范圍。

3. 本試劑盒制備的 cDNA 產(chǎn)物僅適用于 qPCR 反應(yīng)，不適用于進(jìn)行長片段目的基因的 PCR 擴增。

4. 由于本試劑盒中不含有 gDNA 去除步驟，建議加入 No RT Control 反應(yīng)步驟。若 RNA 樣本中含有

ToloScript RT SelectMix for qPCR 反轉(zhuǎn)錄酶包含新一代逆轉(zhuǎn)錄酶 ToloScript Reverse Transcriptase （RTase）和針對逆轉(zhuǎn)錄優(yōu)化

的緩沖液，進(jìn)一步提高了 cDNA 合成的效率，適用于兩步法 qRT-PCR 反應(yīng)。試劑盒中可根據(jù)實驗需求選擇 Oligo

(dT)23VN、Random Primers 以及基因特異性引物為逆轉(zhuǎn)錄引物。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物兼容染料法與探針法 qPCR，可進(jìn)行基

因表達(dá)的高效分析。

產(chǎn)品組成

組分

22102-01

RNase-free ddH2O

2 × 1 mL

5 × ToloScript qRT SelectMixa 反轉(zhuǎn)錄酶

400 μL

Oligo (dT)23VN（10 μM）

100 μL

Random Primers (50 ng/μL)

100 μL

5 × No RT Control Mixb

40 μL

a. 包含 Buffer、dNTP、ToloScript RTase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo (dT)23VN primer mix。

b. 除不含 ToloScript RTase 外，其余成分與 5 × ToloScript qRT SelectMix 相同，用于配制 No RT 對照反應(yīng)。

保存條件

-20 ℃儲存。

質(zhì)量控制

純度檢測：所有組分經(jīng)檢測均無核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶及 RNase 殘留。

功能檢測：以 1 µg HeLa 細(xì)胞總 RNA 為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，通過 qPCR 檢測 4 個基因的表達(dá)量，Ct 值在批次間產(chǎn)

品中基本相同。在 1 µg HeLa 細(xì)胞總 RNA 中混入 100 ng 人 gDNA，經(jīng) 2-Step gDNA Erase-Out Mix 處理后加入 No

RT Control Mix，然后進(jìn)行 qRT-PCR，獲得的 Ct 值>40。

實驗流程

1. cDNA 的合成

在 RNase-free 的離心管中配置如下體系，用移液器輕輕吹打混勻。

5 × ToloScript qRT SelectMix

4 µL

Oligo (dT)23VN（10 μM）

or/and Random hexamers (50 ng/μL)

or Gene specific primers (2 μM)

1 μL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

RT SelectMix for qPCR

No RT Control 是指不加逆轉(zhuǎn)錄酶的陰性對照反應(yīng)，用于檢驗 RNA 模板中是否有 gDNA 殘留。

在 RNase-free 離心管中配制如下混合液，用移液器輕輕吹打混勻。

5 × No RT Control Mix

4 µL

Oligo (dT)23VN（10 μM）

or/and Random hexamers (50 ng/μL)

or Gene specific primers (2 μM)

1 μL

模版 RNA

Total RNA 1 pg-1 μg

RNase-free ddH2O

to 20 µL

2. 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

37 ℃*

15 min

85 ℃

5 sec

產(chǎn)物可立即用于 qPCR 反應(yīng)，或凍存于-20℃，并可在半年內(nèi)使用；如需長期存放，則建議將反轉(zhuǎn)錄 cDNA 產(chǎn)物分裝

后凍存于-80 ℃。cDNA 應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項

1. 由于 5 × ToloScript qRT SelectMix 及 5 × No RT Control Mix 中均含有高濃度的甘油，所以在使用前請

短暫離心，并輕彈（或用移液槍輕輕吸打混勻）后，準(zhǔn)確吸取。

2. 在 20 µL 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中建議加入不超過 1 µg 的 Total RNA。若目的基因的表達(dá)量非常低，則可以

多加入 5 µg 的 Total RNA；否則，如果加入 RNA 量過高，可能會超出后續(xù) qPCR 的線性范圍。

3. 本試劑盒制備的 cDNA 產(chǎn)物僅適用于 qPCR 反應(yīng)，不適用于進(jìn)行長片段目的基因的 PCR 擴增。

4. 由于本試劑盒中不含有 gDNA 去除步驟，建議加入 No RT Control 反應(yīng)步驟。若 RNA 樣本中含有