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詳細介紹
產品簡介
發(fā)根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠
感染大多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。K599 發(fā)根農桿菌（NCPPB2659）含
有 pRi2659 農桿堿型 Ri 質粒，具有廣泛的宿主范圍（葫蘆科，豆科，茄科等），同時具有鏈m素
抗性。本公司生產的 K599 化學轉化感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pCAMBIA2301
質粒（卡那m素
抗性）檢測，轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
K599
電轉感受態(tài)細胞
10 ×50 μL
100 ×50μL
定制
基因型：Agrobacterium rhizogenes (StrR ) pRi2659 (agropine type)
存儲條件
-80 ℃保存; 請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除農桿堿型 Ri 質粒 pRi2659 外，無外源質粒 DNA 殘留
電轉法轉化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預冷；或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出，在超凈工
作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發(fā)，然后插入冰中預冷；
2. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 質粒 DNA（體積不大于 5μl），用
200μl 槍頭將感受態(tài)-質?；旌衔锟焖俎D移到預冷的電擊杯中，蓋上杯蓋；
3. 開啟電轉儀，設置參數（2500V ，200Ω，25μF），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成后快速插
入冰中，加入 900μl 無抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細胞轉移到無菌空管中，28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。
（注：此電轉化參數為 Bio-rad 推薦，使用者也可使用電轉儀所推薦的 Protocol 進行操作）
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應抗生素的 YEB 平
板 上，倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天。
注意事項
1. 加入質粒時體積不應大于感受態(tài)體積的 1/10；
2. 電轉感受態(tài)細胞中不可混入氣泡，轉化高濃度的質?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量；
3. 平板上陽性克隆密度不宜過大，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量或最終用于涂板的菌量；
4. K599 具有鏈m素抗性，不可用于具有鏈m素抗性質粒的轉化
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