豬流行性腹瀉病毒(PEDV)ELISA檢測(cè)試劑盒使用說明書：

檢測(cè)原理：試劑盒采用一步間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUT OFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）的存在與否。

豬流行性腹瀉病毒(PEDV)ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟:

①從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

②設(shè)置陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照各 50μL；

③待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加稀釋液 40μL；

④隨后陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

⑤棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

⑥每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

⑦每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測(cè)定各孔的OD 值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷：

①試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔 OD 值平均值≥1.00； 陰性對(duì)照孔 OD 值平均值≤0.15。

② 臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

③陰性判斷：樣品 OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

④陽性判斷：樣品 OD 值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

常見問題解答：

1.   問：如何選擇合適的陽性對(duì)照？

上海軒澤物解答：陽性對(duì)照的基本組成應(yīng)該盡量與檢測(cè)樣本的組成一致，一般陽性對(duì)照多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì)，加入一定量的待檢物質(zhì)。比如：以人血清為標(biāo)本的測(cè)定，陽性對(duì)照多用確定的病人血清或者以覆蓋人血漿為原料加入一定量標(biāo)準(zhǔn)品。

2. 問：我能否在實(shí)驗(yàn)開始前*收集樣品？

上海軒澤物解答：可以。如若收集的樣本不能及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，請(qǐng)保存至-20℃或按照說明書進(jìn)行保存。應(yīng)避免反復(fù)凍融。