如何識(shí)別一級(jí)序列中的C和N末端？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì的一級(jí)序列是由氨基酸按照特定順序通過(guò)肽鍵連接而成的線性結(jié)構(gòu)，在這條多肽鏈的兩端，分別存在N端（氨基末端，N-terminal）和C端（羧基末端，C-terminal）。正確識(shí)別N端和C端對(duì)于dànbáizhì鑒定、功能解析、翻譯后修飾（PTMs）研究以及生物制藥質(zhì)量控制至關(guān)重要。在實(shí)驗(yàn)研究和生物信息學(xué)分析中，通常通過(guò)化學(xué)特性、實(shí)驗(yàn)測(cè)序方法以及數(shù)據(jù)庫(kù)搜索等策略來(lái)識(shí)別dànbáizhì序列的N端和C端。

一、通過(guò)化學(xué)結(jié)構(gòu)識(shí)別N端和C端

在所有dànbáizhì分子中，N端和C端具有不同的化學(xué)特性，這使得它們?cè)谝患?jí)序列中可被明確區(qū)分：

1、N-端（N-terminal）

是dànbáizhì序列的起始點(diǎn)，其zuì前端的氨基酸具有一個(gè)游離的α-氨基（-NH?），除非經(jīng)過(guò)修飾（如乙酰化）。

2、C-端（C-terminal）

是dànbáizhì序列的終止端，其zuì后一個(gè)氨基酸的羧基（-COOH）通常游離，或可能被修飾（如酰胺化）。

二、通過(guò)實(shí)驗(yàn)方法識(shí)別N端和C端

實(shí)驗(yàn)上，可以利用多種方法來(lái)測(cè)定和確認(rèn)dànbáizhì的N-端和C-端。

（1）Edman降解（Edman Degradation）：該方法通過(guò)異硫氰酸苯酯（PITC）選擇性地標(biāo)記N-端氨基酸，并通過(guò)化學(xué)降解逐步切割N-端殘基，逐步解析其序列。Edman降解可直接確認(rèn)N-端的氨基酸序列，但對(duì)乙?；?、甲?；刃揎椀腘-端無(wú)效。

（2）質(zhì)譜分析（LC-MS/MS）：高分辨率質(zhì)譜結(jié)合特定蛋白酶（如Lys-N）酶解，可檢測(cè)到N-端肽段，從而推斷N-端序列及其修飾狀態(tài)。

（3）化學(xué)標(biāo)記：Dansyl chloride 或 Dabsyl chloride 可用于N-端特異性標(biāo)記，隨后進(jìn)行光譜檢測(cè)。

（1）羧肽酶降解（Carboxypeptidase Digestion）：使用特定的羧肽酶逐步水解C-端的氨基酸，并通過(guò)色譜或質(zhì)譜檢測(cè)釋放的殘基，以推測(cè)C-端序列。

（2）質(zhì)譜分析（LC-MS/MS）：利用特定C-端蛋白酶（如Asp-N、Glu-C）進(jìn)行定向酶切，然后通過(guò)LC-MS/MS鑒定C-端肽段，進(jìn)一步確認(rèn)C-端的氨基酸序列。

（3）化學(xué)標(biāo)記：利用C-端羧基特異性標(biāo)記試劑（如Click Chemistry），結(jié)合質(zhì)譜或熒光檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)C-端的jīngzhǔn識(shí)別。

三、通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)和生物信息學(xué)方法識(shí)別N端和C端

在dànbáizhì組學(xué)研究中，生物信息學(xué)工具和數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)可以幫助識(shí)別N-端和C-端：

1、數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)（Database Search）

已知蛋白的一級(jí)序列存儲(chǔ)于dànbáizhì數(shù)據(jù)庫(kù)（如UniProt、PDB、NCBI），可以直接比對(duì)推測(cè)N-端和C-端的氨基酸序列。

2、翻譯起始位點(diǎn)預(yù)測(cè)

通過(guò)基因序列翻譯軟件（如ExPASy Translate）分析mRNA序列，可以推測(cè)dànbáizhì的起始氨基酸（通常是jiǎliúānsuān，Met）。

3、C-端信號(hào)預(yù)測(cè)

某些蛋白的C-端具有特征性信號(hào)序列，如泛素化位點(diǎn)、跨膜錨定序列等，可通過(guò)生物信息學(xué)工具（如SignalP、NetPhos）預(yù)測(cè)C-端功能和修飾。

dànbáizhì的N-端和C-端可以通過(guò)其化學(xué)特性直接識(shí)別，N-端具有游離氨基（-NH?），而C-端具有游離羧基（-COOH）。實(shí)驗(yàn)上，Edman降解和質(zhì)譜分析是識(shí)別N-端的主要方法，而C-端則常通過(guò)羧肽酶降解或質(zhì)譜技術(shù)解析。此外，化學(xué)標(biāo)記和生物信息學(xué)工具也可用于輔助識(shí)別。在dànbáizhì組學(xué)研究中，高分辨率質(zhì)譜結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)搜索已成為zuì常見(jiàn)的N-端和C-duāncèxù方法。未來(lái)，隨著新型化學(xué)修飾策略和人工智能數(shù)據(jù)分析的發(fā)展，N-端和C-端的識(shí)別將更加jīngzhǔn和高效，為dànbáizhì功能解析、疾病研究和生物制藥提供更加可靠的工具。百泰派克生物科技為廣大客戶提供dànbáizhìN/Cduāncèxù服務(wù)。我們的“一站式"服務(wù)能為您節(jié)省時(shí)間和精力，幫助您更高效地開(kāi)展相關(guān)研究。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)先進(jìn)，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

如何識(shí)別一級(jí)序列中的C和N末端？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹