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土壤植酸酶(phytase)試劑盒說明書

時間:2025/1/13閱讀:456
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土壤植酸酶(phytase試劑盒說明書

分光光度法 50 /24 

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:

植酸酶(phytase)是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸(鹽)的一類酶的總稱,屬磷酸單酯水解酶,它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉化為可供有機體利用的有效磷,降低糞便中的磷含量,減輕對環(huán)境的污染,改善營養(yǎng)成分的吸收和利用,因此具有極其廣泛的研究和應用價值。

測定原理:

植酸酶在一定溫度和pH 值條件下,水解底物植酸鈉生成無機磷與肌醇衍生物,無機磷在酸性環(huán)境中與鉬酸銨顯色劑反應生成藍色復合物,在 700nm 處有特征吸收峰,根據(jù) 700nm 處吸光值變化可計算得植酸酶活性。

組成:

 

產(chǎn)品名稱

BO6092-50T/24S

Storage

緩沖液:液體

60ml

4℃

試劑一:粉劑

1

4℃避光

試劑二:液體

30ml

4℃

顯色劑:粉劑

6

4℃避光

說明書

一份

 

試劑一:粉劑×1 瓶,4℃避光保存,臨用前加緩沖液 30ml 配制,現(xiàn)用現(xiàn)配;用不完的試劑 4℃保存一個月。

顯色劑:粉劑×6 瓶,4℃避光保存,臨用前根據(jù)用量每瓶加 1ml 雙蒸水溶解,再加 4ml 試劑二混勻。

自備儀器和用品:

天平、低溫離心機、可見分光光度計、1ml 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋,甲苯(不允許快遞)。

樣本理:

新鮮土樣自然風干或 37 度烘箱風干,過 30~50 目篩。

測定操作表:

 


對照管

測定管



樣本g

0.06

0.06


甲苯

40

40

振蕩混勻,室溫放置 15min

緩沖液µl

1000


試劑一µl


1000

混勻,37℃孵育 24h,10000g,4℃離心 5min,取上清

上清

500

500

顯色劑µl

500

500

混勻,靜置 15min,測定 700nm 處吸光值,A=A 測定管-A 對照

管。每個測定管設一個對照管。

 

酶活性計算公式:

標準曲線:y = 1.759x + 0.0084R2 = 0.9977;x 為標準品濃度(μmol/ml ),y 為吸光值A。

酶活性定義: 37℃pH5.5 的條件下,每克土樣每小時從 5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋放出 1μmol 的無機磷為一個酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/h /g 土樣)=A-0.0084÷1.759×V 反總÷W÷T

=0.41×A-0.0084

V 反總:反應總體積,1.04ml ;T:反應時間,24h;W:樣本質量,0.06g。

注意事項:

1、顯色劑需要臨用前根據(jù)用量配制,每一瓶是 5 個樣本的用量,新配制的顯色劑若有顏色則已經(jīng)污染或者試劑過期,應放棄使用。

2、ΔA 線性范圍為 0.01-1


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