果膠酯酶（pectinesterase，PE）試劑盒說明書

(NaOH 滴定法)50 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

果膠酯酶, 屬果膠酶系,亦稱為果膠酶、果膠甲酯酶、果膠氧化酶。催化水解果膠長鏈上的甲氧酯水解產(chǎn)生小分子物質(zhì)果膠酸和甲醇, 從而增加果膠在水中的溶解度。廣泛存在于高等植物和可以降解細(xì)胞壁的細(xì)菌和真菌中，起內(nèi)源調(diào)控植物細(xì)胞壁上及細(xì)胞之間果膠含量的作用，在食品工業(yè)中具有及其重要的作用和開發(fā)前景。

測定原理：

果膠酯酶催化水解果膠分子釋放H⁺，使反應(yīng)體系的 pH 下降，用堿液維持體系的 pH 始終保持在 7.8(fen酞指示劑維持在粉紅色)，通過堿消耗的NaOH 量反映果膠酯酶的活性。

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試劑的組成和配制：

提取液：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前每瓶加雙蒸水 100ml 充分溶解。

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加少量蒸餾水溶解，然后轉(zhuǎn)入 500ml 容量瓶，用蒸餾水定容至500ml。

試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。易揮發(fā)，使用后及時用封口膜封口。試劑四：用蒸餾水將試劑三稀釋 5 倍，得試劑四。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

需自備的儀器和用品：

天平、研缽、離心機(jī)、烘箱。

樣品處理：

稱取 1g 組織樣品，加入 2ml 提取液冰浴充分研磨（研缽提前-20℃預(yù)冷 10min，提取液提前 4℃預(yù)冷?？梢愿鶕?jù)客戶自己的樣本特殊性，自行按比例調(diào)整），12000g、4℃離心 15min，取全部上清液待測。

測定步驟：

1、試劑一于 37℃烘箱保溫 10min，樣本全部提取上清（約 2ml）分別轉(zhuǎn)移至 15 ml 離心管或者試管中。

2、向樣本上清中分別加入 50μl 試劑二，混勻。然后每管加入 8 ml 試劑一混勻，并用試劑四調(diào)節(jié) pH至 7.8（粉紅色）。

3、將上述各離心管或試管放置 37℃烘箱 60 分鐘。每隔 20 分鐘用試劑四調(diào)節(jié) pH，使pH 維持在 7.8（粉紅色）。記錄所消耗的試劑四的體積V（ml）。

計算公式：

酶活定義：每 g 組織每分鐘消耗 1μmol NaOH 定義為一個酶活單位 U。 PE 活性（U/g）= 20VF/(TW)= VF/(3W)

V：滴定所消耗的試劑四的量，ml；T：反應(yīng)時間，60 min；F：樣品稀釋倍數(shù)；W：樣品質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)

1、試劑一提前預(yù)熱，保證酶反應(yīng)速率。

2、實(shí)驗(yàn)前先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果酶活力太高，適當(dāng)調(diào)整樣本稀釋倍數(shù)，如將樣品稀釋 2-5 倍進(jìn)行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

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