小鼠磷酸化磷酸肌醇3激酶(P-PI3K)elisa試劑盒 酶聯(lián)免疫 的標準操作說明概要，供參考。具體步驟請以實際試劑盒說明書為準。

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一、實驗前準備

1. 試劑與材料

   • 試劑盒（含標準品、檢測抗體、酶標板、底物A/B、終止液、洗滌液、封板膜等）。
   • 樣本（血清、血漿、組織勻漿液等）。
   • 37℃恒溫箱、離心機、移液器、洗板機（或手動洗板）、酶標儀（450nm波長）。

2. 樣本處理

   • 血清/血漿：離心分離（3000×g，10分鐘），取上清液。
   • 組織勻漿：勻漿后離心（5000×g，10分鐘），取上清。
   • 樣本需避免反復(fù)凍融，4℃短期保存或-80℃長期保存。

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二、操作步驟

1. 標準品配制

• 將標準品凍干粉用稀釋液復(fù)溶，按說明書梯度稀釋（如0、10、20、40、80 pg/mL）。

2. 加樣

• 每孔加入100 μL樣本或標準品，設(shè)空白孔（僅加稀釋液）。
• 覆蓋封板膜，37℃孵育90分鐘。

3. 洗滌

• 棄去孔內(nèi)液體，每孔加350 μL洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)3次。拍干殘留液體。

4. 檢測抗體孵育

• 每孔加入100 μL生物素化抗體工作液，37℃孵育60分鐘。
• 洗滌3次（同步驟3）。

5. 顯色反應(yīng)

• 每孔加入100 μL酶結(jié)合物（HRP標記），37℃避光孵育30分鐘。
• 洗滌5次（chedi去除洗滌液）。

6. 終止反應(yīng)與讀數(shù)

• 每孔加50 μL終止液，15分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm波長測定OD值。

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三、結(jié)果計算

1. 繪制標準曲線
   • 以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，擬合標準曲線（常用Logistic四參數(shù)模型）。
2. 樣本濃度計算
   • 根據(jù)樣本OD值代入標準曲線公式，計算LPA濃度。

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四、注意事項

1. 嚴格避免交叉污染，加樣時更換槍頭。
2. 洗滌步驟需chedi，避免殘留影響信號。
3. 標準品和試劑需恢復(fù)至室溫后再使用。
4. 終止液具有腐蝕性，操作時需戴手套。
5. 若OD值超出標準曲線范圍，需調(diào)整樣本稀釋比例。

小鼠磷酸化磷酸肌醇3激酶(P-PI3K)elisa試劑盒 酶聯(lián)免疫
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