腫瘤組織HE染色實驗技術(shù)方案

?一、實驗原理?

• ?染色機制?：蘇木精（堿性染料）與細胞核DNA結(jié)合顯藍紫色，伊紅（酸性染料）與胞質(zhì)蛋白結(jié)合顯粉紅色，形成核質(zhì)對比

• ?病理學(xué)意義?：通過細胞形態(tài)異常（如核分裂增多、核質(zhì)比失調(diào)）輔助鑒別腫瘤性質(zhì)

?二、實驗流程?

1. ?樣本前處理?

• ?固定?：腫瘤組織需4%多聚甲醛固定≥48小時，避免自溶

• ?脫水包埋?：梯度乙醇脫水→二甲苯透明→石蠟浸漬（60℃）

2. ?切片制備?

• 厚度5 μm，45℃水浴展片，60℃烤片1小時防脫片

3. ?染色步驟?

• ?脫蠟?：二甲苯Ⅰ/Ⅱ各10分鐘

• ?復(fù)水?：100%→75%乙醇梯度水化，蒸餾水沖洗

• ?核染色?：蘇木精3分鐘→1%鹽酸酒精分化30秒→流水返藍

• ?質(zhì)染色?：伊紅2分鐘（腺癌等可延長至5分鐘）

• ?封片?：中性樹膠封固，避免氣泡

?三、結(jié)果判讀?

• ?正常組織?：核藍紫色規(guī)則，胞質(zhì)粉紅色均勻

• ?腫瘤特征?：

• 核異型性（大小不一、深染）

• 病理性核分裂象

• 間質(zhì)浸潤（膠原纖維排列紊亂）

?四、注意事項?

• ?質(zhì)量控制?：分化時間需精確控制，避免過染或欠染

• ?特殊樣本?：

• 纖維瘤需縮短伊紅染色時間（防過深）

• 轉(zhuǎn)移癌建議增加連續(xù)切片數(shù)量